DEAE Sepharose F   DEAE-瓊脂糖凝膠 FF  （100ml）

3.4 酶標(biāo)抗體稀釋度的優(yōu)化
抗原包被濃度為4ug/ml,將酶標(biāo)抗體做系列稀釋：1：100，1：200；1：300；1：400；1：500；1：600；1：1000；經(jīng)孵育、洗滌后、顯色終止后，用自動酶標(biāo)儀分析（表7），選擇A值為1.5左右的酶標(biāo)抗體稀釋度為zui適工作濃度。

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3.5 酶標(biāo)抗體保護液的優(yōu)化
低濃度的酶標(biāo)抗體極容易受到高溫、微生物、以及蛋白酶的影響而失活，嚴重影響產(chǎn)品的貨架期，過去通常將酶標(biāo)抗體凍干保存，然而這樣的保存，不僅由于在凍干的過程中會影響酶標(biāo)抗體的活性，而且在臨床應(yīng)用中頗為不便。適當(dāng)?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標(biāo)抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設(shè)計了一組保護劑用于保護酶標(biāo)抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標(biāo)抗體做對照，將經(jīng)保護的酶標(biāo)抗體及未保護的酶標(biāo)抗體置于37℃烘箱中放置6天，考察保護液對酶標(biāo)抗體的影響。
3.6 底物液的優(yōu)化
常用的作為酶聯(lián)免疫吸附試劑有OPD和TMB系統(tǒng)，由于OPD有致癌的危險性以及用前需要溶解等諸多缺點，因此我們選用TMB作為底物系統(tǒng)，采用文獻報道的方法：取適量的TMB溶解在DMSO中，然后加入適量的超純水，配制作為底物B液；溶解適量的過氧化氫尿素于100mM磷酸-檸檬酸緩沖液中，配制作為底物A液，用前將底物A液及底物B液等體積混合。
在文獻報道的基礎(chǔ)上，我們適當(dāng)調(diào)整了TMB的用量以及過氧化氫尿素的用量，并加入了酶促進劑，與文獻報道的底物進行比較。實驗方案為：將活化的辣根過氧化物酶分別作1：1000；1：10000；1：100000；1：200000；1：400000；1：800000等系列稀釋，比較兩種不同配方的底物的靈敏度（表10）。

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