人結(jié)腸癌細胞系：SW48細胞，SW480細胞，CACO-2細胞，SW620細胞，HCT-8細胞，HCT/V細胞，HCT-116細胞，LoVo細胞，HRT-18細胞，HT-29細胞等

人宮頸癌細胞系：hela細胞，HT-3細胞，C33A細胞，SN12C細胞，SKG-IIIa細胞，Hela S3細胞，DoTc2-4510細胞，Ca Ski細胞 ，ME-180細胞等

DC2.4細胞株  MC38細胞株，MLE-12細胞，bEND.3細胞 HT-22細胞，HK-2細胞 THP-1細胞 WRO細胞 FRO細胞 Molt-4細胞系 SH-SY-5Y細胞 U87-MG細胞

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產(chǎn)品名稱：SKMEL-2細胞

中午名稱：人惡性黑色素瘤細胞

來源：美國ATCC

種屬：人

來源：皮膚

生長狀態(tài)：貼壁生長

細胞形態(tài)：多邊形

代數(shù)：3-5代

數(shù)量：大量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

質(zhì)控：無污染、無支原體、符合標(biāo)準(zhǔn)

SKMEL-2細胞|ATCC引進|人惡性黑色素瘤細胞復(fù)蘇操作步驟：

1.佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

2.迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。

3.在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細胞密度較高，及時傳代。或無需離心直接將細胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12～24小時后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞復(fù)蘇的注意事項：

1.細胞復(fù)蘇時要注意融化凍存細胞的應(yīng)注意融化凍存細胞速度要快，可不時搖動安瓿或冷凍管，使之盡快通過zui易受損的溫度段(-5～0℃)。

2.凍存液對細胞有毒性，解凍后必須用Dhanks洗兩遍才能移入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。培養(yǎng)液中血清不能太少。

3.從液氮拿出來，以zui快速度丟入37度水浴，等細胞液剛剛化完取出，加培養(yǎng)液稀釋。這樣可以避免復(fù)蘇過程中細胞液中有冰晶的出現(xiàn)，冰晶會破壞細胞膜及細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的。

4.剛復(fù)蘇的細胞還是少折騰它好，細胞37°快速解凍后直接放入預(yù)熱的培養(yǎng)基。

5.DMSO在4度以下對細胞無毒，4度以上有毒；復(fù)蘇必須盡快除去。要記得慢凍速溶！

6.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。

7.常溫下二甲基亞砜（DMSO）對細胞的毒副作用較大，因此，必須在1-2 min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)蘇溫度太低，會造成細胞的損傷，所以選擇40℃復(fù)蘇。

8.貼壁細胞復(fù)蘇實驗標(biāo)準(zhǔn)流程是將解凍后的細胞懸液先進行離心，以去除冷凍保護液DMSO對細胞的損傷，但是離心也會對剛復(fù)蘇的狀態(tài)欠佳的細胞產(chǎn)生損傷。也有的實驗操作是將解凍后的細胞懸液先直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。這可能使培養(yǎng)基中少量的DMSO對細胞造成損傷。

細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的原因：

1.凍存細胞的時候是不是消化時間過長，這是一般人注意不到的地方，要知道太長的消化時間會上細胞復(fù)蘇時失去鐵壁能力。

2.有可能是細胞凍存液的原意，細胞凍存液的質(zhì)量不好也會導(dǎo)致細胞死亡。

3.你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過7%，大于5%，太多也不好。

4.你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。

5.凍存時溫度梯度是不是把握嚴(yán)格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。

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公司所提供的實驗細胞及其子代，不能用于人體實驗和臨床診斷、治療。

細胞狀態(tài)不好解決方法：培養(yǎng)基一次不要配太多，根據(jù)用量決定。

細胞外源微生物的污染：細胞不宜長期體外培養(yǎng)，因為外源微生物污染的幾率大大提高。易發(fā)現(xiàn)和難發(fā)現(xiàn)的，影響細胞狀態(tài)。

建議：實驗前凍存一批細胞，隔幾個月重新復(fù)蘇。既保證實驗所用細胞代數(shù)*，又將外源污染的后果降到zui低。

致電或電聯(lián) 咨詢SKMEL-2細胞的傳代次數(shù)、報價、以及技術(shù)咨詢、SKMEL-2細胞的說明書等等。

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DMEM高糖培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11995065）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+4mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.。貨號。15630-080)

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