熒光基因擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)(QPCR)基礎(chǔ)知識(shí)

  1. QPCR的概念QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)，也叫實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增熒光檢測(cè)系統(tǒng)，簡(jiǎn)稱QPCR。

  2. 相比以前的方法，QPCR的特點(diǎn)n 所用儀器少，只用一臺(tái)儀器。n 檢測(cè)時(shí)間短，只須45分鐘～1小時(shí)10分鐘（試劑各異），而定性PCR須3～4小時(shí)，酶免終點(diǎn)定量須5～6小時(shí)，熒光終點(diǎn)定量須2～3小時(shí)。n 操作極其簡(jiǎn)單：前處理后，樣本插入儀器一小時(shí)后到電腦上來(lái)出報(bào)告即可，無(wú)須開蓋，移樣本（以前方法），避免污染。n 結(jié)果：定性PCR只能定性，很粗略，終點(diǎn)定量PCR由于只能在40個(gè)熱循環(huán)結(jié)束后檢測(cè)熒光，被測(cè)熒光達(dá)到飽和導(dǎo)致定量不夠，屬于半定量狀態(tài)。而實(shí)時(shí)熒光QPCR是在擴(kuò)增的每時(shí)每刻連續(xù)檢測(cè)各樣本的熒光值的變化，如圖一所示：檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍：100～1010 DNA copies/ml檢測(cè)精度：0.1RLU辨別率：5000和10,000個(gè)模板拷貝樣本的辨別率99.7％。

  3. QPCR的技術(shù)*性、價(jià)格及應(yīng)用現(xiàn)狀實(shí)時(shí)熒光QPCR是當(dāng)今世界用于臨床的核酸分子診斷技術(shù)，被美國(guó)FDA承認(rèn)并推崇，被美國(guó)FDA批準(zhǔn)并取得臨床應(yīng)用執(zhí)照的QPCR試劑品種有：HBVDNA，HCV丙肝RNA，HIV愛(ài)滋病RNA，Chlamydi trachomatis（CT），性傳播疾病，沙眼衣原體，Neiserria gonorrhea (NG)，性傳播疾病，淋病雙球菌，Cytomegalovirus（CMV），性傳播疾病，巨細(xì)胞，Mybobacterium tuberculosis（Mtb），呼吸道疾病，結(jié)核分支桿菌等。
  4. QPCR、DNA檢測(cè)、PCR之間的關(guān)系聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction簡(jiǎn)稱PCR）原理憑借敏感、特異、快速的特點(diǎn)榮獲93年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。因其在病原體檢測(cè)方面的*優(yōu)勢(shì)，因而發(fā)達(dá)在相關(guān)方法和儀器方面的研發(fā)非常快，成為分子生物學(xué)診斷的主流，至今仍處于學(xué)術(shù)和應(yīng)用前沿：代產(chǎn)品：基因擴(kuò)增儀系列熱循環(huán)儀（DNA Thermal Cycler）+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑，構(gòu)成PCR定性檢測(cè)。第二代產(chǎn)品：基因擴(kuò)增熱循環(huán)儀+熒光儀+終點(diǎn)定量試劑，構(gòu)成PCR-DNA終點(diǎn)法定量檢測(cè)（End-point quantitative PCR detection），又分為終點(diǎn)酶免定量（ End-point ELISA-PCR）和終點(diǎn)熒光定量（End-point Fluor-PCR）兩種。第三代產(chǎn)品：實(shí)時(shí)定量QPCR儀＋實(shí)時(shí)熒光定量試劑，構(gòu)成QPCR-DAN/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。

 5. QPCR的應(yīng)用領(lǐng)域答：熒光基因擴(kuò)增儀主要應(yīng)用在醫(yī)療檢驗(yàn)、疾病防控、食品安全、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖、分子生物、法醫(yī)鑒定、科研探究等諸多領(lǐng)域。