肥婆老熟妇精品视频在线-就去吻亚洲精品日韩都没-女生抠那里小视频-翘臀后插手机自拍

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，用于志賀氏菌的PCR體外特異性檢測。檢測靈敏度為100拷貝/mL。定量檢測線性范圍為：10-10¹⁰拷貝/mL。

本試劑盒必須在-20℃下避光保存，有效期為6個月。

1.         DNA提取：取增菌液1mL加到1.5mL無菌離心管中，10,000rpm離心5min，棄去上清；加入50µL DNA提取液，充分混勻后沸水浴5 min，13,000rpm離心5min，取上清液進行檢測或保存于-20℃以待檢測。

2.1.        從試劑盒中取出PCR反應液，冰盒上融化后混勻。試劑在使用前2000rpm離心20s備用。

2.2.        設需要的PCR反應管管數為N（N = 待檢樣本數+ 1管陰性對照 +1管陽性對照）。

2.3.        混合液的配制：先吸取體積為22.6（µL）×N反應液1.5mL滅菌離心管，再加入Taq DNA聚合酶0.4 （µL）×N，混勻后2000rpm離心20s，然后向N 個0.2mL PCR反應管中分裝已加入Taq酶的混合液23µL/每管，蓋緊管蓋。

2.4.        注意：陰性對照管建議在此區(qū)中加入2µL陰性對照樣品。

3.1.        陽性對照取出解凍，使用前2000rpm 離心20s。

3.2.        將保存在-20℃的核酸提取物置室溫解凍，以13,000rpm離心5min；向N個PCR管中分別加入待檢樣本DNA（包括陽性對照）2µL，蓋緊管蓋，2000rpm離心20s，將PCR反應管轉移核酸擴增區(qū)。注意做好樣品號標記。

4.1.        上機前應檢查各反應管是否蓋緊。

4.2.        反應體系設為25µL；熒光信號采集設定在退火溫度。對于多通道熒光PCR儀，選擇熒光素FAM為信號采集通道。

4.3.       PCR循環(huán)參數為：*階段，95℃  3 min預變性；

第二階段，[95℃ 10s；60℃ 40s] × 40次循環(huán)。

注意：在的LightCycler上使用，變性溫度95℃改為93℃，其他不變。

5.1   綜合分析儀器給出的各項數據及擴增曲線，設定合理的閾值（Threshold）和基線（Baseline），使儀器給出正確的結果。

5.2   陰性對照C_T值應顯示為0或≥40.0，陽性對照的C_T值應≤30.0，否則視實驗失敗，需重做。

5.3   檢測樣品C_T≤35.0，結果有效，可直接報告樣品陽性。

5.4   檢測樣品35.0<C_T>40.0，需進行一次重復實驗，若C_T仍介于35.0和40.0之間，且曲線有明顯的指數增長特性，同時陰性對照Ct值為零，可報告樣品陽性，否則報告樣品陰性。

5.5   檢測樣品C_T值為零，報告樣本陰性。

l         Cepheid公司的SmartCycler

l         ABI公司的Prism7000、7700、7500、9600系列

l         Stratagene公司的MX3000、MX4000

l         Corbett Research公司的Rotor-Gene 3000

l         Bio-Rad公司的iCycler系列、MJ opticon2

l         公司的LightCycler等

1.         本試劑盒僅用于體外檢測使用，操作人員必須經過培訓并具有一定的經驗，試劑盒使用前請仔細閱讀說明書全文。

2.         請嚴格按照基因擴增檢驗實驗室的管理規(guī)范進行實驗操作。

3.         PCR實驗嚴格分區(qū)操作；各區(qū)應有的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作人員應遵循從一區(qū)到二區(qū)的單方向工作原則，各工作區(qū)相對隔離；進行PCR實驗的工作桌面和及相關物品應定期用1%次氯酸鈉、75%酒精、1mol/L鹽酸或紫外燈進行滅菌和消毒。

4.         試劑盒中各試劑充分融化后請短暫離心。反應液分裝時應盡量避免產生氣泡。上機前應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免污染儀器。