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人腫瘤壞死因子操作步驟：

1．取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中（空白孔視為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，用醫(yī)用蒸餾水替代）

2、分別標(biāo)記樣品編號(hào)，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）。

3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘；

4、將酶標(biāo)板板取出，將其中的液體甩去，每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體;

5、每個(gè)孔中加滿應(yīng)用洗滌液后，輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

6、重復(fù)第5個(gè)步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。

8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。

9、將酶標(biāo)板取出，將其中的液體甩去，每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體。

10、每個(gè)孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后，室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

11、重復(fù)第5個(gè)步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

12、在每個(gè)孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。（A液、B液采用不同的吸頭加樣）

13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。

14、每個(gè)微孔中加入50μl的終止液，輕輕振蕩混勻。

15、在酶標(biāo)儀上，450nm處測(cè)定OD; 顯色后，15分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。

16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本含量

人腫瘤壞死因子結(jié)果判斷

1. 儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；

2、檢測(cè)值范圍：0－800pg/ml

3、敏感度：1.0pg/ml

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