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細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：1075 發(fā)布時(shí)間：2014-7-25
細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)
細(xì)胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法：
(1) 、細(xì)胞培養(yǎng)基試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
(2) 、棄掉培養(yǎng)基皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。
(3) 、用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘（37。C，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞*從壁上脫落下來為止。
(4) 、加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
(5) 、用Tip頭多次吹吸，使細(xì)胞*分散開。
(6) 、將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
(7) 、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞加入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。
(8) 、將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
(9) 、將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞培養(yǎng)基分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們?cè)诜治錾V上取得了良好的分離效果時(shí)，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度。
1、上樣量的調(diào)整：他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長(zhǎng)和柱內(nèi)徑有關(guān)：
具體關(guān)系時(shí);制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備豬場(chǎng)/分析柱長(zhǎng)*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。
2、流速的調(diào)整：
制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長(zhǎng)/分析柱長(zhǎng)*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。
3、梯度的調(diào)整：
制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速。