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細胞培養(yǎng)基分析轉(zhuǎn)染效率的影響因素
點擊次數(shù)：1638 發(fā)布時間：2014-8-8
細胞培養(yǎng)基分析轉(zhuǎn)染效率的影響因素
1．轉(zhuǎn)染試劑
不同細胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇實驗設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。當然，的是、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。
2．細胞狀態(tài)
一般低的細胞代數(shù)（<50）能確?；蛐筒蛔?。轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，zui容易轉(zhuǎn)染。細胞培養(yǎng)基在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株，在各實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。因此，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復(fù)*結(jié)果。
3．轉(zhuǎn)染方法
不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實驗室培養(yǎng)基的細胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實驗室的具體條件來確定*轉(zhuǎn)染條件。
?。?）細胞培養(yǎng)物
健康的細胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細胞密度，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會有專門的說明。推薦在轉(zhuǎn)染前24 小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA 攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。
?。?）細胞密度
細胞培養(yǎng)基密度對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。不同的轉(zhuǎn)染試劑，要求轉(zhuǎn)染時的zui適細胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會因不同的細胞類型或應(yīng)用而異。轉(zhuǎn)染時過高或者過低的細胞密度會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，乃至表達水平偏低。因此如果選用新的細胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑，能夠進行優(yōu)化實驗并為以后的實驗建立一個穩(wěn)定方法，包括適當?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時間等等。陽離子脂質(zhì)體具有微量的細胞毒性而往往需要更高的鋪板密度或者更多的懸浮細胞數(shù)，有的要求細胞90%匯片；而有些多胺或者非脂質(zhì)體的配方則要求在40%-80%之間，總之是盡量在細胞zui適的生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)染，以求*的轉(zhuǎn)染效果。