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人癌胚抗原ELISA試劑盒技術分析
最近更新時間：2016-12-29
提 供 商：上海研生實業(yè)有限公司資料大?。?/span>15KB
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人癌胚抗原ELISA試劑盒技術分析
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶7終止液6ml×1瓶
2 酶標試劑6ml×1瓶8標準品（800pg/ml）0.5ml×1瓶
3 酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5 顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6 顯色劑B液6ml×1/瓶1密封袋1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
400pg/ml5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
200pg/ml4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
100pg/ml3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
50pg/ml2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
25pg/ml號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。