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ELISA試劑盒樣本的重要性
點(diǎn)擊次數(shù)：865 發(fā)布時(shí)間：2016-5-3
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法，是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單，方便，靈敏，特異性強(qiáng)且不需要特殊設(shè)備（只需要酶標(biāo)儀就可以），所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。
但是影響ELISA測定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技術(shù)要求，如操作手法，環(huán)境，樣本等，有時(shí)?？梢姷揭恍╁e(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性）等，樣本的重要性關(guān)系到整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，上海極威生物為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響
1、樣本的保存：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、會(huì)造成假陽性；為避免上述問題，在ELISA試劑盒測定血清標(biāo)本時(shí)能新鮮采集；如果不能立即測定，根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度，5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存；如凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
2、樣本的時(shí)間：因?yàn)樗芰显嚬苣芪娇乖镔|(zhì)，所以樣本長時(shí)間放在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。的方法是使用真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
3、樣本受細(xì)菌污染：因菌體中可能會(huì)含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，可能會(huì)產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
4、樣本的凝固：樣本凝固不全。在實(shí)驗(yàn)中，有的時(shí)候心急為了爭取時(shí)間快速檢測，ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時(shí)候就強(qiáng)行離心分離血清，導(dǎo)致血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
5、樣本溶血：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?？赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。