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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

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供應(yīng)簡(jiǎn)介

HMGB1 蛋白，分子量約30KD。HMGB蛋白是非組蛋白的重要組成成分，同時(shí)被認(rèn)為是重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。HMGB1蛋白的主要受體包含晚期糖基化終產(chǎn)物受體。

詳細(xì)介紹

HMGB1 ELISA 檢測(cè)試劑盒

1 簡(jiǎn)介

HMGB1蛋白zui近被認(rèn)為是感染性休克病晚期炎癥反應(yīng)的介質(zhì)。許多疾病發(fā)生時(shí)HMGB1蛋白的濃度會(huì)增高，包括關(guān)節(jié)炎、急性肺損傷、癌癥、彌漫性血管內(nèi)凝血及外科手術(shù)。

2 應(yīng)用

用于定量檢測(cè)人、牛、豬、兔、小鼠、大鼠、血清、血漿、腦脊髓液、細(xì)胞培養(yǎng)上清，支氣管肺泡灌洗液中的HMGB1蛋白。不受人、牛、豬、兔、大鼠、小鼠血清\血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液中HMGB2蛋白的干擾。

注：該試劑盒只限科研應(yīng)用，非診斷試劑。

3 試劑盒組成

組成	數(shù)量/規(guī)格
HMGB1多克隆抗體包被板	96孔（8X12）
POD 標(biāo)記抗HMGB1 單抗（凍干粉）	1瓶，12ml
標(biāo)準(zhǔn)品（豬HMGB1，凍干粉）	1瓶
陽性對(duì)照（豬HMGB1，凍干粉）	1瓶
樣品稀釋液（緩沖液包含添加劑和防腐劑）	1瓶，20ml
POD標(biāo)記抗體稀釋液（緩沖液包含添加劑和防腐劑）	1瓶,12ml
顯色劑A	1瓶,6ml
顯色劑B	1瓶,6ml
終止液（0.35mol/L 的硫酸）	1瓶,12ml
5X 洗液（5x 洗滌緩沖液包含吐溫20）	2瓶,100 ml
封板膜	2張

4 檢測(cè)原理

HMGB1 ELISA 檢測(cè)試劑盒應(yīng)用2步法夾心ELISA 檢測(cè)HMGB1蛋白。96孔板已包被HMGB1的特異性多抗。加入檢測(cè)樣本。HMGB1蛋白特異性結(jié)合包被抗體。加入POD標(biāo)記的HMGB1 單抗，形成抗原抗體復(fù)合物，加入顯色底物顯色。加終止液終止后，檢測(cè)450nm的OD值。

5 操作程序

5-1實(shí)驗(yàn)器材

微量移液器、量筒、洗板機(jī)、振蕩器、EP管、溫箱（37℃，25℃ ）、酶標(biāo)儀

5-2 試劑準(zhǔn)備

包被板：可以直接使用，已包被抗體。重新裝好剩余的板條，2-8℃保存

樣品稀釋液：直接使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：用樣品稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，終濃度320ng/ml。參考小瓶上標(biāo)簽說明操作。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。按表1所示，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品做倍比稀釋。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，可在-30℃保存1個(gè)月。避免反復(fù)凍融，每個(gè)實(shí)驗(yàn)都需做標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。

陽性對(duì)照：用樣品稀釋液稀釋陽性對(duì)照品。參考小瓶上標(biāo)簽說明操作。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。陽性對(duì)照品的濃度范圍，參照小瓶標(biāo)簽上濃度。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，可在-30℃保存1個(gè)月。避免反復(fù)凍融。

POD 標(biāo)記抗體稀釋液：用全部稀釋液，稀釋POD標(biāo)記抗體。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。陽性對(duì)照品的濃度范圍，參照小瓶標(biāo)簽上濃度。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，可在 -30℃保存1個(gè)月。避免反復(fù)凍融。

底物稀釋液：用之前請(qǐng)先置于室溫，等體積混合溶液A 和溶液B。

終止液：直接使用

洗脫液：用蒸餾水4：1稀釋5X 洗脫液。

表1：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法

稀釋方法	濃度（ng/ml）
S1:300ul樣品稀釋液中，加入100ul 320ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液混合。	80
S2:100ul樣品稀釋液中，加入100ul S1,混勻。	40
S3: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S2,混勻。	20
S4: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S3,混勻。	10
S5: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S4,混勻。	5
S6: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S5,混勻。	2.5

5-3 樣品準(zhǔn)備

1000 xg 離心15min，從采血管中迅速收集血清/血漿。如果離心不充分或血清/血漿在血細(xì)胞中相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間后，由于細(xì)胞溶解，HMGB1蛋白水平會(huì)增高。收集的血清/血漿樣品，需保存到-80℃。避免反復(fù)凍融。

HMGB1水平可通過檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清，腦脊液，支氣管肺泡液來檢測(cè)。對(duì)于FBS（胎牛血清）培養(yǎng)的細(xì)胞上清，F(xiàn)BS中的牛的HMGB1水平也需要檢測(cè)，因此需要做一個(gè)陰性對(duì)照。

如果樣品HMGB1的濃度太高，超過了標(biāo)準(zhǔn)品zui高濃度，請(qǐng)稀釋樣品后再檢測(cè)。

5-4 注意事項(xiàng)：

1 所有試劑在用之前室溫放置至少30min。

2 有可能會(huì)在一些孔中看到晶體，但這并不影響實(shí)驗(yàn)，沒有必要在用之前對(duì)其洗滌。

3 每個(gè)實(shí)驗(yàn)都必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4 用塑料管稀釋樣品盒標(biāo)準(zhǔn)品。

5 如實(shí)驗(yàn)需更高靈敏度，請(qǐng)參照第6部分說明。

5-5 實(shí)驗(yàn)程序

1 每孔中加入100ul 樣品稀釋液。

2 空白孔加入10ul 樣品稀釋液。

3 加入10ul 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品到對(duì)應(yīng)的孔。如果有陽性對(duì)照，加入10ul 樣品對(duì)照。

4 用振蕩器振板混勻后，用封板膜封板，37℃孵育20-24 小時(shí)。振板時(shí)，請(qǐng)小心，避免液體濺出孔外。

5 用洗液（400ul/孔）人工或洗版機(jī)洗板5次。zui后一次洗完后，倒扣板，置干凈的吸水紙上，拍板4-5 次，去除孔內(nèi)的液體。

6 每孔加入100ul POD 稀釋液。

7 用封板膜封板，25℃ 孵育2小時(shí)。

8 用洗液（400ul/孔）人工或洗版機(jī)洗板5次。zui后一次洗完后，倒扣板，置干凈的吸水紙上，拍板4-5 次，去除孔內(nèi)的液體。

9 清潔板的背面，不要?jiǎng)潅椎?，以免影響檢測(cè)結(jié)果。

10 加入100ul 底物溶液加樣間隔時(shí)間相同，用封板膜封板，避免反應(yīng)中受其它物質(zhì)的污染。

11 加入100ul 終止液。（加樣間隔時(shí)間相同）

12 在加入終止液60分鐘內(nèi)，讀取波長(zhǎng)450nm OD值。

13 減去空白孔OD值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品的OD值。如果檢測(cè)樣品是稀釋后的樣品，實(shí)際樣品濃度為標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度乘以稀釋倍數(shù)。

6 檢測(cè)參數(shù)

檢測(cè)范圍：2.5-80ng/ml

靈敏度：1ng/ml

重復(fù)性：批內(nèi)差異 CV < 10% （n= 8）

批間差異 CV < 10% （n= 8）

回收率：80-120%

按以下操作程序，檢測(cè)靈敏度可達(dá)到0.2 ng/ml：

1）每孔加入50ul 樣品稀釋液。

2）加入50ul 樣品稀釋液（空白孔）、標(biāo)準(zhǔn)品及檢測(cè)樣品

3）后續(xù)操作按5-5 操作程序的第4步開始做。對(duì)于這個(gè)檢測(cè)范圍，標(biāo)準(zhǔn)品濃度應(yīng)稀釋至10ng/ml 以下。檢測(cè)的特異性、重復(fù)性、回收率不變。

7 保存期和有效期

有效期截止日期參照盒上注明。2-8度保存，不能凍。

8 注意事項(xiàng)

1）此試劑盒為科研用，非診斷試劑。

2）用前請(qǐng)閱讀試劑盒說明書和MSDS 說明書。

3）不要將不同盒子內(nèi)不同批次的組分混起來用或使用盒子內(nèi)過期的試劑。

4）所有試劑在使用前請(qǐng)置于室溫至少30min。

5）嚴(yán)格按照說明書準(zhǔn)備試劑和檢測(cè)樣本。

6）1000 xg 離心15min，從采血管中迅速收集血清/血漿。如果離心不充分或血清/血漿在血細(xì)胞中相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間后，由于細(xì)胞溶解，HMGB1蛋白水平會(huì)增高。收集的血清/血漿樣品，需保存到-80℃。避免反復(fù)凍融。

7）恰當(dāng)保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、陽性對(duì)照和POD標(biāo)記抗體稀釋液。試劑在-30℃以下可保持穩(wěn)定性1年。避免反復(fù)凍融。重新裝好未使用的板條，到干燥機(jī)的鋁箔袋，與其它試劑一并保存于2-8 ℃。

8）每個(gè)實(shí)驗(yàn)都需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9）仔細(xì)處理樣品，避免污染。

10）樣品稀釋液含少量的疊氮鈉，疊氮鈉如污染了鉛或銅金屬，會(huì)發(fā)生爆炸。處理時(shí)用大量的水清洗，避免疊氮鈉的成積。

11）終止液為酸（PH < 2）。因此需小心，避免接觸到皮膚或眼睛。

12）所有試劑和樣品都有潛在的危險(xiǎn)。小心操作和處理。如果接觸到了皮膚或粘膜，用大量的水沖洗。如有其它的不良癥狀，請(qǐng)咨詢醫(yī)生。

訂購信息

品牌	貨號(hào)	名稱	規(guī)格
IBL	ST51011	HMGB1 ELISA kit	kit

15921799099

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