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恒遠(yuǎn)與大家分享細(xì)胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟

閱讀:1045          發(fā)布時(shí)間:2014-5-14

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟

(一)原理:細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,須進(jìn)行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

(二)細(xì)胞傳代培養(yǎng)具體操作                                            

1、細(xì)胞:貼壁細(xì)胞株

2、操作步驟

1)將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5-1ml 0.25胰酶溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1-3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

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