關(guān)鍵詞:proimmune公司品牌代理
簡介：proimmune公司品牌代理原裝**，質(zhì)量保證,*。
我公司作為在華銷售的品牌代理商，提供一系列的標(biāo)準(zhǔn)、新穎、*的生化試劑，所有這些產(chǎn)品均具有*的純度和高超的品質(zhì)。
我公司是國內(nèi)信譽(yù)雙收的放心企業(yè)代理商，具有良好的市場信譽(yù)與口碑，我們有一對一的*的老師對客戶進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)，專業(yè)的銷售和技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊，歡迎廣大師生、研究機(jī)構(gòu)等，洽商。
產(chǎn)品簡介：
我公司——依托復(fù)旦大學(xué)，集研發(fā)、銷售、實驗室技術(shù)服務(wù)于一體的高科技企業(yè)。專業(yè)經(jīng)營進(jìn)口胎牛血清、細(xì)胞因子、ELISA試劑盒等實驗室試劑、化工產(chǎn)品、實驗室消耗品、實驗室耗材以及實驗室器材。產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域。主要產(chǎn)品及服務(wù)： 血清 細(xì)胞 抗體 細(xì)胞因子 試劑盒 實驗試劑 實驗耗材 技術(shù)服務(wù) 實驗儀器
實驗技術(shù)服務(wù)內(nèi)容。歡迎廣大師生選購。
產(chǎn)品價格：詢價
用產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。
英國ProImmune 公司是免疫學(xué)功能檢測多聚體產(chǎn)品和服務(wù)*的*。產(chǎn)品包括重組的MHC Class I 五聚體和MHCClass II 六聚體，用于特異性的T 細(xì)胞免疫功能檢測。廣泛用于腫瘤，傳染性疾病，自身免疫學(xué)疾病和移植等熱門領(lǐng)域的基礎(chǔ)，新藥和臨床研究。
五聚體(ProImmune)結(jié)合胞內(nèi)細(xì)胞因子染色在國外正在成為很多實驗室的常規(guī)實驗。五聚體可用于檢測和分離少至淋巴細(xì)胞0.02%的抗原特異性CD8+T細(xì)胞群。然而，并不是所有的抗原特異性T細(xì)胞都具有功能，功能性細(xì)胞的比例因個體和疾病不同而異?？梢酝ㄟ^對另外的胞內(nèi)細(xì)胞因子聯(lián)合染色來研究抗原特異性T細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能。
細(xì)胞因子的產(chǎn)生對免疫反應(yīng)起著重要的作用。細(xì)胞因子作用的范例包括干擾素-γ（IFNγ）誘導(dǎo)產(chǎn)生的許多抗病毒蛋白、IL-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的T細(xì)胞增殖、以及腫瘤壞死因子α（TNFα）對病毒基因表達(dá)和復(fù)制的抑制。細(xì)胞因子不是預(yù)先形成的，而是在受到相關(guān)刺激時才迅速產(chǎn)生和分泌的。因此，胞內(nèi)細(xì)胞因子的染色依賴于在蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑存在的情況下（以將細(xì)胞因子截留在細(xì)胞內(nèi)）對細(xì)胞的刺激。
激起細(xì)胞因子產(chǎn)生的細(xì)胞活化一般會導(dǎo)致T細(xì)胞受體的下調(diào)。因此，如果需要同時檢測T細(xì)胞特異性，則應(yīng)在細(xì)胞活化前進(jìn)行Pro5R五聚體染色以確保染色水平。在此期間五聚體可能會與T細(xì)胞受體一同被內(nèi)化，但仍可以在透化細(xì)胞內(nèi)檢測到。研究抗原特異性T細(xì)胞的效應(yīng)功能時，先將細(xì)胞以五聚體染色，然后再用抗原刺激，隨后用針對細(xì)胞外表位（如CD8）的特異性抗體進(jìn)行染色，zui后再進(jìn)行膜透化和胞內(nèi)細(xì)胞因子染色。
Pro5R五聚體結(jié)合胞內(nèi)細(xì)胞因子染色檢測IFNγ、TNFα、MIP-1β或IL-2
操作步驟：步驟10前的所有操作在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用無菌緩存液和無菌條件。
1.離心Pro5R五聚體，冷凍微型離心機(jī)（14000×g，5min）。
2.制備外周血細(xì)胞，PBS中細(xì)胞濃度2×107cells/ml。
3.分別將細(xì)胞懸液50μl加入到多個試管中。
4.添加熒光標(biāo)記的五聚體到需要的試管中，22℃孵育10min（無刺激的信號對照在該步驟時不要染色）。在剩下的試管中加入10μl的PBS。
5.在每個管中加入500μlPBS，離心450×g，5min，10℃。
6.去掉上清液，震動分散細(xì)胞，用200μl的R10培養(yǎng)液重懸。
7.用R10培養(yǎng)液1:50稀釋肽蛋白原液。取2μl（終濃度10μg/ml）加入到需要的管中。
如果使用LAC作為對照，在37℃水浴中快速復(fù)溶，取0.33μl至每個需要的管。使用后，丟棄剩下的LAC。
8.將試管置于37℃，加濕CO2培養(yǎng)箱中孵育15min-1h。
9.加入Brefeldin A（終濃度10μg/ml）到需要的管中（注意：LAC中含有Brefeldin A），重新放回培養(yǎng)箱中孵育15h。孵育中產(chǎn)生特定細(xì)胞因子的*刺激階段是不同的，是需要確定的。上述實驗中16h的孵育時間是對人PBMCs用10μg/ml肽蛋白刺激誘導(dǎo)產(chǎn)生IFNγ的*孵育時間。根據(jù)刺激方法和選擇的細(xì)胞因子效應(yīng)，孵育時間各不相同。
10.從培養(yǎng)箱中取出試管，離心450×g，5min，10℃。
11.去除上清，在需要的管中用50μl含*濃度的anti-CD8抗體的PBS重懸細(xì)胞，其它管中加50μlPBS。
信號-顏色對照在此步驟時染色。另外，如果需要樣本額外的亞型，針對其它細(xì)胞表面標(biāo)志或受體的抗體也在這時加入。
12.冰上孵育20min。
13.每管加入500μlPBS洗滌，離心450×g，5min，10℃。
14.去除上清，震動分散細(xì)胞。
15.每個樣本管加入200μl 4% Paraformaldehyde，渦旋混勻。冰上孵育20min。
此步中要固定活細(xì)胞形態(tài)。
此步時操作可以暫停，重復(fù)進(jìn)行13和14步，重懸細(xì)胞，100μlPBS/管，遮蓋管口，細(xì)胞放4℃可儲存3天。再次進(jìn)行操作時，重復(fù)步驟13和14，重懸細(xì)胞每管200μl Permeabilization，然后進(jìn)行步驟17。
16.每管加入200μl Permeabilization。
17.離心450×g，5min，10℃，棄上清。
18.樣品管加入100μl Permeabilization，用抗細(xì)胞因子抗體染色。在剩余管（如信號-顏色對照）中加入100μl的PBS。
19.室溫孵育5min。
20.加入*濃度的FITC-抗細(xì)胞因子抗體到需要的樣品管中，混勻。
21.室溫孵育20min。
22.每管加入200μl Permeabilization，離心450×g，5min，10℃，棄上清，震動分散細(xì)胞。
23.200μl Fix buffer重懸細(xì)胞，渦旋混勻。
加入固定液時渦旋是很重要的，以使細(xì)胞不會成團(tuán)。
注意：
1.孵育階段：特定的細(xì)胞因子誘導(dǎo)刺激的*時間是不同的需要確定的。上述實驗中16h的孵育時間是對人PBMCs用10μg/ml肽蛋白刺激誘導(dǎo)產(chǎn)生IFNγ的*孵育時間。根據(jù)刺激方法和選擇的細(xì)胞因子效應(yīng)，孵育時間各不相同。
2.肽蛋白濃度：調(diào)查細(xì)胞因子反應(yīng)效應(yīng)的滴度。
3.五聚體染色：細(xì)胞活化產(chǎn)生細(xì)胞因子可能會使T細(xì)胞受體下調(diào)，這會影響隨后的五聚體染色，所以，推薦五聚體在細(xì)胞活化之前染色。
4.抗體濃度：調(diào)查anti-CD8和anti-cytokine抗體的有效滴度。anti-CD8抗體滴度會阻止其它抗體介導(dǎo)的封閉或與五聚體競爭結(jié)合的位點。
5.蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)抑制：Brefeldin A抑制細(xì)胞內(nèi)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中BrefeldinA菌的存在會阻止蛋白質(zhì)在高爾基復(fù)合體的轉(zhuǎn)運(yùn)，使蛋白質(zhì)積聚在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)。Brefeldin A菌會增強(qiáng)大多數(shù)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測，所以，建議在特定的實驗中需要檢查實驗試劑的有效性，是否含有蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)制抑制劑（如Monensin）。
6.背景染色：當(dāng)進(jìn)行五聚體染色時，如果背景染色過高，需先用Fc封閉或10%小鼠血清來封閉細(xì)胞。其它減少非特異染色的方法可參見ProImmune相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)。
7.如果需要沒有五聚體結(jié)合的胞內(nèi)細(xì)胞因子染色則去掉實驗步驟1-4
所有這些產(chǎn)品均具有*的純度和高超的品質(zhì)。完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。