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                               ELISA試劑盒操作常見(jiàn)問(wèn)題及流程

 

上海撫生ELISA 試劑 為你揭幕大家會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及流程。

               1.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？

雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。

2.血清樣本如何處理？

全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 血漿樣本如何處理？

建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

4.細(xì)胞上清液樣本如何處理？

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細(xì)收集上清。5.細(xì)胞裂解液樣本如何處理？

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或者超聲破碎，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6.組織樣本如何處理？

用預(yù)冷的PSB （0.01M,pH=7.4）沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。