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組織脫鈣/硬組織脫鈣/骨組織脫鈣
組織脫鈣
脫鈣:由于骨組織里有鈣鹽,影響常規(guī)石蠟切片制作,因此骨組織及鈣化病灶固定后,需先將鈣鹽除去使組織軟化,才能進(jìn)行常規(guī)切片。若脫鈣不充分,則切片易碎裂,并損傷切片及刀刃,脫去鈣鹽的過(guò)程即脫鈣。
實(shí)驗(yàn)原理:
骨組織不同于一般的軟組織,它是一種堅(jiān)硬的結(jié)締組織,有骨基質(zhì)和骨細(xì)胞組成。骨基質(zhì)是由有機(jī)物質(zhì)和無(wú)機(jī)物質(zhì)緊密結(jié)合而成,主要成分有由粘多糖和一些膠原纖維樣骨膠纖維構(gòu)成的骨樣組織和沉著于其中的無(wú)機(jī)鹽(骨鹽)形成。無(wú)機(jī)鹽以羥基磷灰石結(jié)晶的形式存在,其中絕大部分為水合磷酸鈣,此外還包括微量碳酸鹽和檸檬酸鹽等。因此骨和其它一些已經(jīng)鈣化的組織在脫水、透明等制片前必需將組織中的鈣鹽用脫鈣劑除去,才能制成4~5 um厚的切片。目前,常用的脫鈣劑有單純酸類、混合酸類、螯合劑、離子交換樹(shù)脂和電解脫鈣等方法。
操作方法:
(1)取材
樣本如股骨頭、牙齒、病變骨、碎骨組織等,針對(duì)不同的樣本采用骨鉗或骨鋸將其鋸成厚度不超過(guò)0.5 cm的骨片,剝?nèi)ス墙M織周圍的軟組織。
(2)固定
將處理好的骨片放入固定液中固定12-24 h。
(3)脫鈣
樣本固定好之后,將其放入脫鈣液中脫鈣一定時(shí)間,時(shí)間依據(jù)脫鈣液和標(biāo)本而定。
(4)脫鈣結(jié)束
用細(xì)針輕刺可進(jìn)入而不感到阻力,判定脫鈣結(jié)束。脫鈣后的組織經(jīng)流水沖洗后,行常規(guī)石蠟切片。
注意事項(xiàng):
骨組織經(jīng)10%福爾馬林固定好后進(jìn)行脫鈣,未經(jīng)固定的組織在脫鈣液中易受損傷,骨組織過(guò)大或過(guò)厚,脫鈣時(shí)間較長(zhǎng),可能1-2個(gè)月,若長(zhǎng)時(shí)間浸于強(qiáng)酸脫鈣液中會(huì)影響切片、染色效果。因此,在不影響診斷的條件下,應(yīng)將骨組織周圍的組織剝離。
優(yōu)質(zhì)脫鈣劑的標(biāo)準(zhǔn)是:脫鈣充分、不損傷骨組織細(xì)胞或纖維、不影響后續(xù)染色(如HE染色、免疫組化等)、脫鈣速度不易過(guò)長(zhǎng)。
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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