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高效液相色譜儀常用檢測(cè)器及其性能

時(shí)間:2022/10/31閱讀:2396
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液相色譜檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào),常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

01液相色譜常用檢測(cè)器紫外吸收檢測(cè)器

紫外吸收(UV)檢測(cè)器是目前HPLC應(yīng)用廣泛的檢測(cè)器。其工作原理是朗伯-比爾定律。這種檢測(cè)器靈敏度高,線性范圍寬,對(duì)流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測(cè)要求被檢測(cè)樣品組分有紫外-可見(jiàn)光吸收,而使用的流動(dòng)相無(wú)吸收,或在被測(cè)組分吸收波長(zhǎng)處無(wú)吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè),以獲得最大靈敏度和抗干擾能力。在沒(méi)有最大吸收時(shí),可采用末端吸收。檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇除取決于待測(cè)物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外,還必須考慮流動(dòng)相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過(guò)波長(zhǎng)下限值,超過(guò)這個(gè)波長(zhǎng),溶劑的吸收會(huì)變得很強(qiáng),以至于不能很好地測(cè)出待測(cè)物質(zhì)的吸收強(qiáng)度。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過(guò)波長(zhǎng)的下限。

02液相色譜常用檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器

光電二極管陣列檢測(cè)器(photodiode array detector,PDAD)又稱(chēng)快速掃描紫外可見(jiàn)分光度計(jì),是一種新型的光吸收檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件,形成多通道并行工作,同時(shí)它對(duì)光柵分離的所有波長(zhǎng)的光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè),然后將其入射到陣列接收機(jī),然后快速掃描二極管陣列來(lái)采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(L)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),從而迅速?zèng)Q定具有靈敏度的波長(zhǎng)。計(jì)算機(jī)化的數(shù)據(jù)處理,還可進(jìn)行色譜峰光譜相似性比較、峰純度檢測(cè)及利用譜圖庫(kù)對(duì)樣品進(jìn)行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。

單光束二極管陣列檢測(cè)器,光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池,透射光由全息光柵色散成多色光,射到陣列元件上,使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái),每幅圖像僅需要10ms,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。

03液相色譜常用檢測(cè)器熒光檢測(cè)器

熒光檢測(cè)器(fluorescence detector, FD)是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器,可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測(cè)器的原理與熒光分析法相同,化合物受紫外光激發(fā)后,發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光,稱(chēng)為熒光或發(fā)射光。許多藥物和生命活性物質(zhì)具有天然熒光,能直接檢測(cè),某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物,然后進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng/mL,適用于痕量分析。一般情況下,熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí),但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。近年來(lái),采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比,因而具有很高的靈敏度,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。 


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