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哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程 & 培養(yǎng)條件

閱讀:1192      發(fā)布時(shí)間:2019-5-24
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哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程
哺乳動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)經(jīng)過(guò)組織提取,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng)等過(guò)程。傳代培養(yǎng)會(huì)根據(jù)具體情況分為細(xì)胞株培養(yǎng)和細(xì)胞系培養(yǎng)。如下對(duì)各個(gè)過(guò)程進(jìn)行簡(jiǎn)述:
原代培養(yǎng):從動(dòng)物機(jī)體取出組織后切碎,經(jīng)過(guò)各種酶(常用胰蛋白酶),螯合劑(常用EDTA)結(jié)合機(jī)械方法(吸液管反復(fù)吸吹)處理,分散成單細(xì)胞,置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。一般把從動(dòng)物有機(jī)體內(nèi)取出細(xì)胞開(kāi)始培養(yǎng),到繁殖十代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

經(jīng)過(guò)原代細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞分裂繁殖,培養(yǎng)物逐漸增多長(zhǎng)滿培養(yǎng)空間,繼而相互之間接觸,發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象,生長(zhǎng)速度逐漸減慢甚至停止。需要重新接種到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)進(jìn)行傳(繼)代培養(yǎng)。
傳(繼)代培養(yǎng):將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出,配制成細(xì)胞懸浮液,分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳(繼)代培養(yǎng)。
細(xì)胞系:初代培養(yǎng)物開(kāi)始次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞,即稱之為細(xì)胞系。如果細(xì)胞系的生存期有限,則稱為有限細(xì)胞系。已獲得無(wú)限繁殖能力,能持續(xù)生存的細(xì)胞系稱為連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系。
細(xì)胞株:從一個(gè)經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系,用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增值形成的細(xì)胞群,稱為細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原珠形狀不同的細(xì)胞群,成為亞株。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件
不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞在各個(gè)階段的培養(yǎng),都需要有基礎(chǔ)的培養(yǎng)條件,歸納如下:
1、無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境:對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無(wú)菌處理;培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過(guò)程中污染;定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物,防止對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。
2、營(yíng)養(yǎng):液體合成培養(yǎng)基包含糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、水、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等;通常還需加入血漿、血清等天然成分
3、適宜的溫度和pH:人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜溫度大多為36±0.5℃。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。
4、氣體環(huán)境:氣體環(huán)境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體。氧氣是細(xì)胞代謝必須氣體,CO2維持培養(yǎng)液pH。

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