大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本含量。應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，通過標準曲線計算樣品濃度。

工具/原料聚苯乙烯塑料板（也就是酶標板）40孔或96孔、ELISA檢測儀、50μl及100μl加樣器、塑料滴頭、小毛巾、洗滌瓶。 2. 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

操作過程 1 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 2 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在上海恒遠生物白介素ELISA試劑盒酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

 3 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 4 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 7 溫育：操作同3。洗滌：操作同5。

8 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

9 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 10 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

END 計算方法

1 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 END 注意事項試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。