植物細胞質壁分離技術分析

時間：2017/2/23閱讀：1293

(1)原代細胞質壁分離法：成長的植物細胞一般具有中央液泡，在中央液泡和細胞壁之間為細胞質的薄層及其內外膜——液泡膜和質膜。液泡中的胞液具有一定的溶質勢(或稱滲透勢)，而活的原生質特別是液泡膜和質膜則具有半透性。所以，當細胞與外界溶液接觸時，便與外液構成滲透系統(tǒng)，并可能發(fā)生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質勢，則水分外滲的結果可使原生質隨著液泡一起收縮而脫離細胞壁，發(fā)生質壁分離，質壁分離的細胞與水或水勢較高的溶液接觸時，可重新吸水而是質壁分離復原。

原代細胞實驗步驟

1、試劑的配置：

① 臺盼藍：4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。

② 中性紅：先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升，用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升，即成0.02%中性紅水溶液，貯存在棕色瓶里，放在黑暗處。

③ 美藍：取0.5克美藍，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液，保存在棕色瓶內。此溶液能染細胞核，還用來染細菌、血和神經組織等。

④ 甲基藍：取1克甲基藍，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸餾水，即成1%甲基藍染液。

2、染色操作步驟：略

3、細胞活力測定：染色過的細胞材料，放在顯微鏡下觀察。凡未染或染色及淺的細胞是有活力的，而染色深的細胞是無活力的死細胞。

4、按公式計算出細胞活力。細胞活力(%)=未染色的細胞數(shù)/觀察的細胞總數(shù) X 100%

原代細胞注意事項

1. 臺盼藍對人體有毒

2. 對細胞進行染色時，時間不宜過長。否則，部分活細胞也會著色，會干擾計數(shù)。