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細(xì)胞系自動化篩選技術(shù)

時間:2018-3-30閱讀:137
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zui常用的細(xì)胞系方法是檢測96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中蛋白的濃度;另外一個方法是讓細(xì)胞在軟瓊脂上生長形成集落,然后利用原位免疫沉淀技術(shù)獲得高產(chǎn)細(xì)胞。近年來,發(fā)展起來的高通量自動化篩選技術(shù)也被受關(guān)注。
   為實現(xiàn)克隆的高表達(dá),在有些情況下外源基因擴(kuò)增,比如以CHO用作宿主細(xì)胞;有些情況則不需要,比如雜交瘤細(xì)胞。為了實現(xiàn)外源基因的擴(kuò)增,將細(xì)胞在高濃度的擴(kuò)增標(biāo)記(比如dhfr)抑制劑的壓力下生長。細(xì)胞存活需要擴(kuò)增標(biāo)記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個擴(kuò)增標(biāo)記基因以外的絕大多數(shù)細(xì)胞。在標(biāo)記基因擴(kuò)增的過程中,與它相鄰的基因也隨之發(fā)生擴(kuò)增。基因拷貝數(shù)的增加導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的提高。在這個過程中,某些高產(chǎn)細(xì)胞株重組IgG重鏈的轉(zhuǎn)錄水平成為細(xì)胞內(nèi)zui高。另一方面,過高的蛋白表達(dá)可能會超過細(xì)胞內(nèi)蛋白折疊的限度,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中發(fā)生未折疊蛋白效應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。因此沒有建立起與高表達(dá)相匹配的其它結(jié)構(gòu)的細(xì)胞可能不能存活。
     基因擴(kuò)增后的細(xì)胞既含有多個拷貝的外源基因,能高水平的表達(dá)目的基因和抗性基因,還具備了強(qiáng)大的蛋白分泌能力。除此之外,高產(chǎn)細(xì)胞株還應(yīng)具備高密度培養(yǎng)和能維持較長平臺期的能力。
    基因擴(kuò)增后的細(xì)胞可以視為一個細(xì)胞“Pool”,其中含有眾多不同遺傳背景的細(xì)胞,或是基因插入位點的不同,或是擴(kuò)增程度的不同等等。因此基因擴(kuò)增后下一步是細(xì)胞的單克隆化。單克隆化是利用流式細(xì)胞儀或有限稀釋法或其他自動化方式(0.2個細(xì)胞/孔)將細(xì)胞接種到多孔板中??梢哉J(rèn)為從某一特定孔里長出的細(xì)胞都是由早期的一個細(xì)胞分裂而來,他們在遺傳上是同源的。
     單克隆化后需要對獲得的細(xì)胞系進(jìn)行初步的評價。主要包括生長特性,產(chǎn)品質(zhì)量的評價。有些情況下需要將細(xì)胞馴化到更接近模式的條件下,進(jìn)行培養(yǎng)。
3x1.5ml    Methyl Alcohol     67-56-1     甲醇標(biāo)準(zhǔn)品
4.5oz            氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品
4.6oz            氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品
4.6oz            氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Zidovudine     30516-87-1     齊多夫定標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Trehalose     6138-23-4     海藻糖標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Tilmicosin     108050-54-0     替米考星標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Sucralose     56038-13-2     三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Sodium Starch Glycolate Type B    9063-38-1     羧甲基淀粉鈉標(biāo)準(zhǔn)品(B型)
400mg    Sodium Starch Glycolate Type A    9063-38-1     羧甲基淀粉鈉標(biāo)準(zhǔn)品(A型)
400mg    Quinapril Hydrochloride     82586-55-8     鹽酸喹那普利標(biāo)準(zhǔn)品
400mg    Octisalate (Octyl Salicylate)    118-60-5     水楊酸乙基己酯標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞系

 

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