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背景介紹

谷胱甘肽（GSH）是細胞內(nèi)重要的抗氧化劑，其水平高低直接反映腫瘤細胞的氧化還原狀態(tài)。肺癌細胞常依賴高 GSH 水平抵御放化療產(chǎn)生的活性氧（ROS），引發(fā)治療抵抗。GSH 作為谷胱甘肽過氧化物酶 4（GPX4）的輔因子，能抑制鐵死亡，而其消耗會致使 GPX4 失活，進而促進鐵死亡，因此 GSH 水平變化是鐵死亡的重要標(biāo)志。動態(tài)檢測GSH，可評估治療是否激活氧化應(yīng)激與鐵死亡通路。此外，檢測 GSH 還能驗證 GSH 響應(yīng)性藥物釋放效率，實現(xiàn)腫瘤特異性激活。

谷胱甘肽檢測在治療肺癌研究中的應(yīng)用

2025年5月8日，復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院陳依婷博士等人在Journal of Nanobiotechnology（IF=10.6）期刊上發(fā)表了題為“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitriteaugmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer"的研究論文。研究團隊設(shè)計了一種基于多不飽和脂肪酸（PUFA）的納米反應(yīng)器 DHA-N@M，通過吸入給藥方式作用于肺部腫瘤。該納米反應(yīng)器由巨噬細胞膜包裹 DHA-SNO（一種 GSH 響應(yīng)性釋放NO的 PUFA 衍生物）構(gòu)成，兼具腫瘤靶向性與 GSH 響應(yīng)特性。實驗顯示，DHA-N@M 可顯著提升藥物在肺腫瘤中的蓄積量，效果優(yōu)于靜脈注射。其作用機制為：通過消耗GSH、釋放NO并生成ONOO?，誘導(dǎo)腫瘤細胞鐵死亡，與放療聯(lián)用可協(xié)同增強抗腫瘤效應(yīng)。在肺癌原位模型中，DHA-N@M 聯(lián)合放療展現(xiàn)出 93.91% 的腫瘤抑制率，且安全性良好。該研究為肺癌治療提供了一種新型吸入式納米藥物遞送系統(tǒng)，通過靶向腫瘤微環(huán)境和增強鐵死亡，顯著提升了放療效果，具有重要的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

圖3 不同處理后Lewis肺癌細胞（E）NO、（F）NOS和（G）ONOO的CLSM圖像

接下來，小愛給大家詳細介紹谷胱甘肽檢測試劑盒（abs580006）的使用方法。

一、試劑盒組分

二、操作步驟

1、材料和試劑準(zhǔn)備

自備材料：酶標(biāo)儀、蒸餾水、移液器與槍頭、研缽、離心機、計時器、濕冰等。

Standard：使用前將0.65 mL蒸餾水加入管中，混勻至wan全溶解；然后取0.05 mL溶液加入0.95 mL蒸餾水中混合均勻，獲得濃度為0.5 mmo/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4°C儲存。

Standard：Dye Reagent：使用前加入4 mL Diluent 溶解。

2、樣本處理

（1）細胞/細菌樣本：將細胞/細菌（5×106）收集到離心管中，離心后去掉上清液，加入1mL Assay buffer，超聲處理（功率20%，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）后于4℃，8000g 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，濕冰上保存待檢測。

（2）組織樣本：稱取0.1g組織，加入1mL Assay buffer在濕冰上勻漿，4℃，8000g 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，濕冰上保存待檢測。

（3）血清/血漿樣本：直接檢測。

3、上樣及檢測

上樣前將所有試劑加熱至37℃，然后按照如下表格加樣。

注：

（1）對于標(biāo)準(zhǔn)品，可進行2倍連續(xù)稀釋（6個點左右），制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）對于未知的樣品，我們建議挑選幾個樣品進行預(yù)實驗，以確定樣品濃度和稀釋倍數(shù)。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于參考，每次實驗都必須做一條新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

檢測范圍：0.01 mmol/L - 0.5 mmol/L

常見問題解答

Q1：試劑盒中的96-Well Microplate只有一個，不夠?qū)嶒炇褂迷趺崔k？
A1：該試劑盒中的96孔板是免費送的，后續(xù)實驗可以用常規(guī)的96孔酶標(biāo)板代替。

Q2：試劑盒操作說明書中既有標(biāo)準(zhǔn)曲線法又有公式法，我應(yīng)該選擇哪種計算方式？
A2：兩種方式任選一種就可以，公式是簡便算法，建議按照標(biāo)曲計算，會更加準(zhǔn)確。需要注意的是，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，每次實驗必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Q3：反應(yīng)過程中出現(xiàn)沉淀，應(yīng)該如何處理？
A3：沉淀或絮狀物大多是因為蛋白質(zhì)濃度過高導(dǎo)致的，建議把樣品從孔板里吸出來離心一下取上清再去檢測，或者把樣品加到離心管里反應(yīng)離心后再取上清加到孔板里檢測。

Q4：儀器無相應(yīng)檢測波長怎么辦？
A4：試劑盒里推薦的檢測波長如果儀器設(shè)置里沒有，可以在說明書推薦檢測波長附近找，在±10nm以內(nèi)一般是沒有問題的。

參考文獻:
[1]Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology. 2025;23(1):338. Published 2025 May 8. doi:10.1186/s12951-025-03409-8

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