商品介紹:
Apoptozole是一個(gè)通過阻斷ATPase活性的Hsp70抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1054543-47-3 純度:99.57% 分子量:625.56 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
炭黑曲霉大鼠中性粒趨化蛋白2Anti-TAF1 Antibody人白調(diào)節(jié)(LR)
松生莖點(diǎn)霉人類嗜T淋巴Ⅰ型病Anti-TACR3 Antibody人血小板生成(TPO)
長雙歧桿菌大鼠FMS樣酪激3Anti-TACR2 Antibody人血小板生成(TPO)
鴨疫里氏桿菌人麻疹病Anti-TAF1 Antibody人白血病抑制因子(LIF)
畢赤酵母大鼠FMS樣酪激3配體Anti-TAF13 Antibody人白血病抑制因子(LIF)
耐冷冷桿菌大鼠堿性成纖維生長因子9Anti-TAF1A Antibody人Salusin-α
香菇人流行性腮腺炎Anti-TAF15 Antibody人Salusin-α
膜醭假絲酵母大鼠堿性成纖維生長因子4Anti-TAF3 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)
咸海鮮芽孢桿菌人抗流行性出血熱病抗體IgGAnti-TAF4 Antibody人胰島受體底物2(IRS-2)
傳染性支氣管炎病人痢疾內(nèi)阿米巴抗原Anti-TAF5 Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)
弗雷德里克斯堡假單胞菌大鼠堿性成纖維生長因子6Anti-TAF5L Antibody人轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)
紫紅曲霉大鼠性成纖維生長因子1Anti-TAF6L Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)
環(huán)形泰勒蟲(安西株)人萊姆IgGAnti-TAGAP Antibody人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)
中間根瘤菌屬人空腸彎曲菌黏附蛋白Anti-TAIP-2 Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)
根瘤菌人衣原體蛋白樣活性因子Anti-TANK Antibody人胰島淀粉樣多肽(IAPP)
玫煙色棒束孢大鼠凋亡相關(guān)因子Anti-TAL1 Antibody人糖化蛋白(GSP)
尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體血紅鉚釘菇HASMC*培養(yǎng)基
未分化胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1抗體一色齒毛菌DMEM 培養(yǎng)基 (高糖)
囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Use1抗體葡萄座腔菌(斜面)大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基
軟骨基質(zhì)相關(guān)蛋白UCMA抗體白色小環(huán)柄菇TM3細(xì)胞專用培養(yǎng)基
Hsp70抑制劑(Apoptozole)多根硬皮馬勃 異香蘭
艱難梭 異龍腦
金灰青霉 鹽酸拓?fù)涮婵?/span>
柑橘炭疽盤孢 異去甲蟛蜞菊內(nèi)酯
金黃色葡萄球金黃亞種 亞麻酸乙酯
大腸埃希 新西蘭牡荊苷
枯草芽孢桿 纈草
類阿達(dá)青霉 關(guān)附甲
綠臭蛙叢毛單胞 旋復(fù)花內(nèi)酯
黑曲霉 8-香葉草氧基補(bǔ)骨脂
林生毛霉 熊果酸乙酸酯
野土地桿 細(xì)辛
釀酒酵母 香葉
根瘤 小檗紅堿硫酸酯
耐冷冷桿 腺