以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Ac-Gly-BoroPro是選擇性的FAP抑制劑,Ki值為23nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):886992-99-0 純度:98.0% 分子量:214.03 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
鏈格孢Streptococcus bovis
空腸彎曲桿菌Vibrio nereis
繩生毛殼Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae
微白類諾氏菌Azotobacter vinelandii
大腸埃希氏菌Curtobacterium albidum
南假單胞菌Proteus vulgaris
大腸埃希氏菌○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○54Xanthomonas campestris pv. malvacearum
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)Xanthomonas campestris pv. amaranthicola
鏈霉菌Enterobacter cloacae
產(chǎn)氣莢膜梭菌 B型Citrobacter freundii
外海橄欖形菌Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae
蜂蜜接合酵母Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae
假密環(huán)菌Rhodobacter sphaeroides
球色單隔孢屬Vibrio vulnificus
深酒紅短鏈游動(dòng)菌Ralstonia pickettii
瑞士乳桿菌Ancylobacter rudongense
豬骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒ATP5E蛋白抗體人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL) 次野鳶尾黃
豬骨成型蛋白7(BMP7)免疫試劑盒ATP5G2蛋白抗體人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL) 甘草查爾
豬谷酰轉(zhuǎn) 免疫試劑盒ATP6V0D2蛋白抗體人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)芒柄花苷
豬谷酰合成(GS)免疫試劑盒ATP6V1B2蛋白抗體人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)囊
FAP抑制劑(Ac-Gly-BoroPro)ZBTB2 英文名稱: 鋅指蛋白437抗體 0.2ml
DNER 英文名稱: 腦表皮生長(zhǎng)因子跨膜蛋白DNER抗體 0.1ml
血管緊張素I抗體 Anti-Ang I/AT1 0.1ml
Anti-factor VIII/PE 熒光素PE標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-eIF4E(Ser209) 磷酸化真核翻譯起始因子4E抗體 規(guī)格 0.1ml
Egr-1(Early growth response 1) 早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長(zhǎng)基因1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg