以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HIF-1抑制劑(LW6) | LW6 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
LW6是新穎的HIF-1抑制劑,IC50值為4.4μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:934593-90-5 別名:HIF-1α inhibitor;LW8 純度:98.0% 分子量:435.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
短乳桿菌Bacillus thuringiensis豬基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)
阪崎腸桿菌Bacillus thuringiensis豬睪(T)
毀滅柱孢菌Bacillus thuringiensis豬睪(T)
大腸埃希菌Bacillus thuringiensis豬肝生長因子(HGF)
槐殼囊孢Bacillus thuringiensis豬肝生長因子(HGF)
猴頭菌Bacillus thuringiensis豬γ干擾(IFN-γ)
褐絲膜菌Bacillus thuringiensis豬γ干擾(IFN-γ)
蠟狀芽孢桿菌Bacillus thuringiensis豬端粒(TE)
巨大栓孔菌Bacillus thuringiensis豬端粒(TE)
康寧木霉Bacillus thuringiensis豬促生長激釋放激(GHRH)
冷湖黃桿菌Bacillus thuringiensis豬促生長激釋放激(GHRH)
煙曲霉Bacillus thuringiensis豬促卵泡(FSH)
黑曲霉Bacillus thuringiensis豬促卵泡(FSH)
茄鏈格孢菌Bacillus thuringiensis豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)
黑曲霉Bacillus thuringiensis豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)
釀酒酵母Bacillus thuringiensis豬表皮生長因子(EGF)
軟脂?;椎鞍?/span>Sprouty1抗體喜溫地芽孢桿菌德比沙門菌
滑膜肉瘤X染色體相關(guān)2抗體綠色北里孢菌O1群霍亂弧菌
鏈激抗體勞倫鏈霉菌摩爾根氏變形桿菌
鏈親和抗體食堿戈登氏菌雷極氏變形桿菌
HIF-1抑制劑(LW6)Phospho-Smad3 (Ser423 + Ser425) 英文名稱: 磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導分子SMAD3抗體 0.1ml
EDG3 英文名稱: 內(nèi)皮分化型G蛋白偶聯(lián)受體3抗體 0.1ml
甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白抗體 Anti-PTHrP 0.2ml
Anti-phospho-Synapsin I (Ser9) /FITC 熒光素標記磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體 規(guī)格 0.1ml
HSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg