以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Piboserod(SB207266)是5-羥色胺受體5-HT4選擇性抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:152811-62-6 別名:SB-207266 純度:98.80% 分子量:369.5 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
培美曲塞(標準品)英文名稱: Methazolamide防御β2/Defensin β2抗體包裝5g
噴昔洛韋(標準品)英文名稱: Ziprasidone多巴受體相互作用蛋白5抗體包裝1g
匹多莫德(標準品)英文名稱: Seratrodast性發(fā)育轉(zhuǎn)錄因子蛋白DMO抗體包裝200mg
匹伐他汀鈣(標準品)英文名稱: Metolazone無胸腺癥關(guān)鍵蛋白6樣抗體(迪格奧爾格綜合征)包裝1g
匹莫丹(標準品)英文名稱: Metolazone軸絲動力蛋白10抗體包裝5g
蘋果舒尼替尼(標準品)英文名稱: Cediranib Maleate D型天冬抗體包裝1g
撲米(標準品)英文名稱: SitagliptinDYDC1蛋白抗體包裝5g
撲熱息痛(標準品)英文名稱: Vildagliptin二氫嘧啶抗體包裝1g
葡內(nèi)酯(標準品)英文名稱: Vildagliptin脫磷結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝250mg
葡鈉(標準品)英文名稱: Acetylsalicylic acidDCST1蛋白抗體包裝25g
葡萄糖鈣(標準品)英文名稱: Acetylsalicylic acidDCUN1D4蛋白抗體包裝5g
葡萄糖鈉(標準品)英文名稱: Orlistat(Fermentation)脫氧輔合蛋白抗體包裝10g
葡萄糖鋅(標準品)英文名稱: Orlistat(Fermentation)短鏈脫氫/還原家族4樣2蛋白抗體包裝1g
普伐他丁鈉(標準品)英文名稱: Nicardipine hydrochlorideDDRGK1蛋白抗體包裝5MG
普伐他汀四基?。藴势罚┯⑽拿Q: Nicardipine hydrochlorideDENND2A蛋白抗體包裝1ml
運動發(fā)酵單孢菌Zymomonas│mobilis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,BR戊型肝炎病抗體試劑盒3,4,5-三咖啡酰奎寧;3,4,5-
食烷菌Alcanivorax│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,培養(yǎng)級戊糖試劑盒三七皂苷Fe;Notoginseng t
: =ATCC486=BCRC14864=CIP82.11=DSM20112=KCTC1370=LMG16695=NBRC12680資源名稱: 雙氮纖維單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6,BR,可用于培養(yǎng)舞蹈病蛋白相互作用蛋白1試劑盒黃皮;Kranjin
5-HT4抑制劑(Piboserod)小鼠抗IVIgG抗體西紅花(標準品)Human, Mouse
大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物西紅花苷II(標準品)Human, Mouse, Rat
大鼠15脂加氧西紅花苷I(標準品)Human, Mouse
小鼠抗心肌抗體西青果(標準品)Human, Mouse
人Bcl-2相關(guān)X蛋白西瑞香(標準品)Human, Rat
人轉(zhuǎn)移因子西洋參(標準品)Human
大鼠肌鈣蛋白Ⅰ菥蓂(標準品)Human
小鼠銅藍蛋白溪黃草(線紋香茶菜)(標準品)Human
大鼠血清淀粉樣蛋白A豨薟草(豨薟)(標準品)Human