超靈敏細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）通過利用高度水溶性的四唑鹽-WST-8進(jìn)行非常方便的測定。WST-8被細(xì)胞中的脫氫酶還原，產(chǎn)生橙色產(chǎn)物（甲贊），可溶解在組織培養(yǎng)基中。CCK-8是非放射性的，允許在細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測定中進(jìn)行靈敏的比色測定，以測定活細(xì)胞的數(shù)量。細(xì)胞中甲酰胺的含量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，可用于檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性。使用CCK-8的檢測靈敏度高于使用其他四氮唑鹽如MTT、XTT、MTS或WST-1的檢測靈敏度。

艾美捷超敏型細(xì)胞增殖檢測試劑(CCK-8)基本參數(shù)：

目錄號：D-AKE106-U

規(guī)格：1000T / 10000T

儲存：在4°C下儲存12個月，在-20°C下至少儲存24個月，避光

超敏型細(xì)胞增殖檢測試劑(CCK-8)供應(yīng)材料和儲存條件：

試劑準(zhǔn)備：

即用CCK-8溶液：即用，無需預(yù)混合成分。

程序分析：

注意：在實(shí)際實(shí)驗(yàn)之前，做一個預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定合適的細(xì)胞數(shù)量和培養(yǎng)時間。如果OD值過高，可以適當(dāng)減少細(xì)胞數(shù)量，可以縮短添加CCK-8的孵育時間，或者可以減少CCK-8負(fù)載量

一、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.用細(xì)胞儀計(jì)數(shù)制備的細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2.用培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，按順序形成細(xì)胞濃度梯度，通常為5-7個細(xì)胞濃度梯度、每個濃度梯度4-6個多孔。

3.接種后，將粘附細(xì)胞或懸浮細(xì)胞孵育0.5-4h，每100μL培養(yǎng)基加入10μL CCK-8試劑孵育一定時間，然后測量OD450值。以單元格數(shù)為x軸，OD450值為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以確定未知樣品中細(xì)胞的數(shù)量。使用該標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是測試條件完-全相同

二、細(xì)胞活性測定方案

1.在96孔板中接種細(xì)胞懸浮液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放入濕潤的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)。

2.在板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入井內(nèi)，因?yàn)樗鼈儠蓴_外徑讀數(shù)。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4小時。培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞密度等實(shí)驗(yàn)條件。

4.使用微孔板讀數(shù)器測量450 nm處的吸光度。

三、細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測定方案

1.在96孔板中分配100μL細(xì)胞懸浮液（5000個細(xì)胞/孔）。預(yù)孵育用于24小時除濕二氧化碳培養(yǎng)箱的平板。

2.將1-10μL不同濃度的待測物質(zhì)加入平板中。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)適當(dāng)?shù)臅r間長度（例如，6、12、24或48小時）。

4.在板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入井內(nèi)，因?yàn)樗鼈儠蓴_外徑讀數(shù)。

5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4小時。培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞密度等實(shí)驗(yàn)條件。

6.使用微孔板讀數(shù)器測量450 nm處的吸光度

超敏型細(xì)胞增殖檢測試劑(CCK-8)FAQ：

1.本品敏感，OD值偶爾偏高。我們應(yīng)該如何處理？

從三個方面進(jìn)行調(diào)整：（1）使用不同數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行檢測，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定合適的細(xì)胞數(shù)量；（2） 縮短CCK-8的孵育時間；（3） 降低CCK-8的負(fù)載量，將CCK8稀釋到合適的濃度以供使用。

2.如何確定該產(chǎn)品的檢測范圍？

建議制作不同細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)穩(wěn)定的線性趨勢確定特定細(xì)胞的檢測間隔。

3.如何設(shè)置細(xì)胞毒性測試？

設(shè)置方法有兩種：（1）將1-10μL不同濃度的待測物質(zhì)加入100μL的細(xì)胞懸浮液中，孵育適當(dāng)?shù)臅r間，然后加入系統(tǒng)中10%的溶液。（2） 在藥物暴露于細(xì)胞一段時間后，使用10%CCK-8檢測細(xì)胞增殖。

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。