人原代角膜上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代角膜上皮細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代角膜上皮細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代角膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分：

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。

1）復(fù)蘇人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基密度。

2）細(xì)胞傳代：如果人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1、收到人原代角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞請(qǐng)先檢查包裝是否完好，如有破損，漏液、渾濁等現(xiàn)象請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們，培養(yǎng)基凍融后，可能會(huì)有少量絮狀物析出，不影響產(chǎn)品正常使用。

2、請(qǐng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書，了解產(chǎn)品使用方法、保存方式、有效期等信息，若因操作失誤，保存不當(dāng)而導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)污染等問題的，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3、本產(chǎn)品僅能用于科研，培養(yǎng)基中的一些組分對(duì)人體有較低的危害性，如有接觸立即用大量清水沖洗即可。