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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人肝竇內皮采用混合酶灌流消化、反復低速離心、密度梯度離心法，并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人肝竇內皮經(jīng)CD31、CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人肝竇內皮原代細胞 | 組織來源 | 肝臟組織 |
英文名稱 | Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7186 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人肝竇內皮細胞細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內皮細胞（SEC）是肝臟內所占比例高的非實質細胞，位于肝竇腔與肝細胞之間，具有物質轉運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結構、細胞間連結松散、內皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內皮細胞窗孔逐漸減少或消失，內皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細血管的結構，這一過程稱為肝竇毛細血管化。它由多種因素引起，其過程極復雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關注。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
Pt K1細胞，長鼻袋鼠腎細胞 人胰腺腺癌細胞,Panc 10.05細胞 CM-M095小鼠成年表皮角質形成層細胞培養(yǎng)基100mL | Rhesus antibody Rh GIMAP2 GTP酶IMAP家族成員2抗體 規(guī)格 0.2ml |
Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit 人癌基因蛋白質p190/bcr-ablMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | PE PE標記的兔抗親和素 0.1ml |
IL-2： 白介素2抗體(大、小鼠) 0.2ml | t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑 96T |
Rhesus antibody Rh RIP3 受體結合絲蘇激酶3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-LEF-1/FITC 熒光素標記淋巴增強因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Tie2 (Ser1119) 0酸化血管生成素受體2抗體 規(guī)格 0.1ml | sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體 96T |
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1 | 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA |
AR42J細胞，人胰腺細胞 人皮膚成纖維細胞系,BJ細胞 小鼠母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] | HT-29(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
人甲狀腺濾泡上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | PPBP Protein Human 重組人 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (His 標簽) |
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-C | 小鼠腸巨噬細胞培養(yǎng)基 100mL |
Malmc細胞，人皮膚纖維微細胞系 光滑念珠菌 雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 | 人肝竇內皮原代細胞t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑 96T |
草魚肝臟細胞;L8824 | 人胚胎絨毛細胞(HAF)(1×106 ) 細胞名稱 種屬 |
IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H021人前列腺平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
IFNA10 Protein Human 重組人 Ierferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 標簽) | Rhesus antibody Rh APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
BRSK1： 絲酸/蘇酸蛋白激酶SAD-B抗體 0.2ml | 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 |
Anti-VSIG4 /FITC 熒光素標記T淋巴細胞負調節(jié)蛋白之一抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PAFAH： 脂蛋脂酶A2抗體 0.1ml |
Anti-CD141/FITC 熒光素標記凝血調節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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