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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人尿道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人尿道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人尿道上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 尿道組織 |
英文名稱 | Human Urethral Epithelial cells | 貨號(hào) | YS-01X7269 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人尿道上皮細(xì)胞分離自尿道管組織；尿道是從膀胱通向體外的管道。尿道上皮細(xì)胞主要功能：①尿道上皮細(xì)胞排列在膀胱表面，它是由高可塑性和具有多種功能特殊類型的細(xì)胞組成；②上皮細(xì)胞組成膀胱的防御系統(tǒng)與病原體接觸，它們具有多種防御機(jī)制來(lái)阻止病原體粘著，保持泌尿器溶解物的不滲透性；③膀胱上皮細(xì)胞表達(dá)雌激素α、β受體，上皮生長(zhǎng)因子受體和纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，在損傷和感染時(shí)，這些受體對(duì)膀胱上皮細(xì)胞起著重要作用；④能釋放許多細(xì)胞因子、免疫系統(tǒng)介質(zhì)。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
U-373MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-373MG-EGFP (Ubc-EGFP leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells DMEM+10% FBS | Rhesus antibody Rh Ghrelin 28 腦腸肽抗體 規(guī)格 0.1ml |
P53(Human p53/tumor protein) ELISA kit 人P53Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IGF1R： 胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體 0.1ml | GP-MM(Mouse Glycogen phosphorylase MM)ELISA Kit 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM 96T |
Rhesus antibody Rh Ribonuclease Inhibitor 核糖核酸酶抑制因子1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-Lamin A/C (Ser22) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核纖層蛋白A/C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Thr181) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | IL-27(human Interleukin 27) ELISA Kit 人白介素27 96T |
IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 | CM-R008大鼠支氣管成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte 小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 Mouse |
BT474 人導(dǎo)管癌細(xì)胞 | MSTN Protein Mouse 重組小鼠 GDF-8 / Myostatin / MSTN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
II型膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL | 硝基苯酸(p)酸酶檢測(cè)試劑盒p |
WI-38人胚肺細(xì)胞 WI-38 in human embryo lung cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | 人尿道上皮原代細(xì)胞GP-MM(Mouse Glycogen phosphorylase MM)ELISA Kit 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM 96T |
人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞RNAHAEC miRNA5 μg | Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293sars181A 人膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-H033人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
人胚胎，皮膚，肌肉;M-7 | Rhesus antibody Rh APOE/Apo E2 載脂蛋白E抗體 規(guī)格 0.1ml |
phospho-B-Raf (Ser444)： 0酸化B-Raf抗體 0.1ml | 人海馬元 |
Anti-Smad4/FITC 熒光素標(biāo)記Smad4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PEBP2B： 多瘤病毒增強(qiáng)了結(jié)合蛋白2β抗體 0.1ml |
Anti-CD155/PVR/FITC 熒光素標(biāo)記CD155抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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