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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人乳腺癌血管周采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人乳腺癌血管周經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人乳腺癌血管周原代細胞 | 組織來源 | 乳腺癌組織 |
英文名稱 | Human Mammary Cancer Pericyte Cells | 貨號 | YS-01X7527 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人乳腺癌血管周細胞分離自乳腺癌組織；女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。乳腺并不是維持機體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前，乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物、細胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3 小鼠骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)基 100mL | NF(Human neurofilament protein) ELISA Kit 人絲蛋白 96T |
RCAS1： 相關(guān)表面抗原RCAS1抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh RAB35 RAS相關(guān)蛋白癌基因Rab35抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCV-NS3/FITC 熒光素標(biāo)記丙型肝炎病毒-NS3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CCZ1： CCZ1蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRMS-1 癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CTLA-4/CD152 /FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細胞相關(guān)抗原4/細胞毒性T細胞抗原-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
原活化蛋白激酶1/2抗體 Anti-ERK2/ERK 0.1ml | phospho-Androgen Receptor (Ser791)： 0酸化雄激素受體抗體 0.1ml |
人星形膠質(zhì)細胞 Human | 犬腎細胞;MDCK(NBL-2) |
HRC-99細胞，人直腸腺癌細胞系 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細胞,C918細胞 小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12 | HMy2.CIR(人B淋巴母細胞) 5×106cells/瓶×2 |
人羊膜細胞;WISH | CNE-2Z(人鼻咽癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
CM-R104大鼠腦膜細胞培養(yǎng)基100mL | CL-0071CT26.WT(小鼠結(jié)腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
2V6.11細胞，人胚腎細胞 小鼠骨髓瘤細胞,P3X63Ag8.653細胞 CL-0405NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人乳腺癌血管周原代細胞CCZ1： CCZ1蛋白抗體 0.2ml |
動物上皮細胞培養(yǎng)基EpiCM-a | HPAC細胞，人胰腺腺泡上皮癌 人舌癌細胞,T6細胞 雜交瘤(B類);C3110D2E11 |
PCSK9 Others Rhesus 恒河猴 PCSK9 / NARC1 人細胞裂解液 (陽性對照) | 瘤牛皮膚細胞;BIN-S1 |
大鼠內(nèi)臟脂肪細胞培養(yǎng)基 100mL | IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GSTCD 硫轉(zhuǎn)移酶C段結(jié)構(gòu)域抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺平滑肌細胞cDNAHPSMC cDNA |
phospho-Ep300 (Ser89)： 0酸化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體 0.1ml | Anti-EDG6/SLP4 內(nèi)皮細胞的分化蛋白6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 人星形膠質(zhì)細胞 Human |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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