詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的人少突膠質采用消化、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人少突膠質經(jīng)GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人神經(jīng)少突膠質原代細胞 | 組織來源 | 腦組織 |
英文名稱 | Human Oligodendrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7388 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
人少突膠質細胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(灰質)覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是元胞體集中的地方。內部則是由纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面,即外側面(約占整個皮質面積的1/3)、內側面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質細胞分布于中樞系統(tǒng),在銀浸染標本中,少突膠質細胞比星狀膠質細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質細胞,其突起并不少,而且還有許多分支。少突膠質細胞的主要功能是在中樞系統(tǒng)中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結構、協(xié)助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護元的正常功能。其異常不僅會導致中樞系統(tǒng)脫髓鞘病變,還會引起元損傷或精神類疾病,甚至可以引發(fā)腦腫瘤。根據(jù)少突膠質細胞的分布和位置可分為三種:①束間少突膠質細胞(interfasicular-oligodendrocyte),分布在中樞系統(tǒng)的白質的纖維束之間;②細胞周少突膠質細胞(perineuronal-oligodendrocyte),分布在中樞系統(tǒng)的灰質區(qū),常位于細胞周圍,與細胞的關系密切,故又稱為細胞周衛(wèi)星細胞(perineuronal-satellite-cell),但在細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質細胞的薄片狀突起分隔;③血管周少突膠質細胞(pcrivascular-oligodendrocyte),主要分布在中樞系統(tǒng)內的血管周圍。少突膠質細胞形成的髓鞘膜是為特化和復雜動物細胞膜之一,其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結構。如半乳糖腦苷脂(GC),它是髓鞘的一種主要類脂,用GC抗體鑒別成熟的少突膠質細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來,發(fā)育學科進展較快,更多的少突膠質細胞分子標記物被鑒定出來,如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 不增殖;不傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
雪旺細胞生長添加物SCGS | NCX2: 鈣交換蛋白2抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MCSF Receptor 巨噬細胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TRH/FITC 熒光素標記促甲狀腺素釋放激素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
TFF3 (trefoil factor3) 三葉肽因子3(多肽) 0.5mg | Anti-OCT1 陽離子轉運器1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Anti-Phospho-Gab1 (Tyr659) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠0酸化接頭蛋白Gab 1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC39A6 SLC39A6抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-PEG10 /FITC 熒光素標記肝癌高表達基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Anti-ARIP2a/FITC 熒光素標記激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人脈絡叢成纖維細胞總RNAHCPF NA | CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細胞裂解液 (陽性對照) |
S100A4 Others Human 人 S100A4 人細胞裂解液 (陽性對照) | EGFR Others Mouse 小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺微血管內皮細胞 (HPMEC)( 5×105 ) rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞 Rattus | SDF2 Others Human 人 SDF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
T-112A乳蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | 人神經(jīng)少突膠質原代細胞Anti-OCT1 陽離子轉運器1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細胞裂解液 (陽性對照) | 小鼠干細胞 |
膀胱成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | FGF18 Others Mouse 小鼠 FGF18 / FGF-18 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HCCC-9810細胞,人膽管細胞型肝癌細胞 小鼠白血病細胞G-CSF依賴性,NFS-60細胞 水貂肺上皮細胞;Mv.1.Lu(NBL-7) | Galanin: 節(jié)肽抗體 0.2ml |
Human coagulation factor X ,F X ELISA Kit 人ⅩMulti-class antibodies規(guī)格: 48T | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD4抗體 Anti-CD4 0.1ml | TR(Human Testoterone recepter) ELISA Kit 人睪酮受體 96T |
ASB10: 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體 0.1ml | LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細胞裂解液 (陽性對照) |