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兔胎盤間充質(zhì)干原代細胞
兔胎盤間充質(zhì)干細胞細胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。胎盤間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一種多能干細胞，是具有自我復制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞像APSC多能細胞。在胚胎發(fā)育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細胞庫。在組織損傷引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據(jù)不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增，體外倍增能力旺盛，能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復種子細胞。相較于其他干細胞，胎盤間充質(zhì)干細胞具有來源方便，細胞數(shù)量充足，易于分離、培養(yǎng)、擴增和純化，傳代擴增多代后仍具有干細胞特性。胎盤是干細胞的佳來源。
英文名稱 | Rabbit Placental Mesenchymal Stem Cells | 組織來源 | 胎盤 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8134 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔胎盤間充質(zhì)干細胞
組織來源：胎盤
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔胎盤間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔胎盤間充質(zhì)干采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔胎盤間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
小鼠B細胞雜交瘤細胞;W6/32 | 白介素-17B抗體 |
絲/蘇蛋白酸酶4C抗體 | 毒蕈堿型乙酰受體M4抗體 |
巖藻糖變旋酶抗體 | 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲肽酶1抗體 |
細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體 | 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2F7抗體 |
7號染色體開放閱讀框65抗體 | 同源盒基因HOXA3蛋白抗體 |
TDGF1 Others Rat 大鼠 Cripto / TDGF1 人細胞裂解液 (陽性對照) | GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移細胞株;PG-BE1 | CLEC10A Others Mouse 小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細胞裂解液 (陽性對照) |
UACC-812(人導管瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 EB-3 [EB3](人淋巴樣Butt淋巴瘤細胞) | BMPR1B Others Human 人 BMPR1B / ALK-6 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD69 Others Human 人 CD69 人細胞裂解液 (陽性對照) | RIN-m5f(大鼠胰島β細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SGC7901(胃腺癌細胞) |
CM-R113大鼠嗅鞘細胞培養(yǎng)基100mL | 兔胎盤間充質(zhì)干原代細胞甘露聚糖結(jié)合凝集素絲肽酶1抗體 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907 人表皮黑色素細胞培養(yǎng)基 100mL | U251 人膠質(zhì)瘤細胞 |
NCTC 1469(小鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 | C-33A細胞，人子細胞 兔主動脈平滑肌細胞,CCC-SMC-1細胞 人表皮角質(zhì)細胞-胎兒HEK-f |
SIGLEC6 Others Human 人 SIGLEC6 / CD327 人細胞裂解液 (陽性對照) | 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 |
富含亮重復跨膜元蛋白4抗體 | 體細胞;HEL 人小腸平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
PHD指蛋白21A抗體 | 氯離子轉(zhuǎn)運蛋白抗體 |
葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4抗體 | TDGF1 Others Rat 大鼠 Cripto / TDGF1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
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