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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 冠狀動(dòng)脈 |
英文名稱 | Mouse Coronary Artery Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7290 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型、均衡型、左優(yōu)勢型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的第一對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層扁平分布，是一薄層的專門上皮細(xì)胞，它形成冠狀動(dòng)脈的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 白介素8抗體 |
蛋白酶體PSMα5抗體 | 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子3抗體 |
酸化范可尼貧血組蛋白A抗體 | 肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體 |
7號(hào)染色體開放閱讀框46抗體 | 鴨瘟病毒DPV抗體 |
1號(hào)染色體開放閱讀框141抗體 | 組胺受體H1抗體 |
DYRK3 Others Human 人 DYRK3 / REDK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人癌細(xì)胞;MDA-MB-231 | TNFRSF19 Others Human 人 TNFRSF19 / OY 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
hMNC-PB single donor Pellet 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一捐獻(xiàn)者，超 > 1 mio.cells 人羊膜上皮細(xì)胞總RNAHAmEpiC NA | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
HA(人羊膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基ECM | HAVCR2 Others Mouse 小鼠 TIM-3 / HAVCR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CM-M042小鼠直腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體 |
TLK2 Others Human 人 TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772 ) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 |
人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素RNAHEM-l miRNA5 μg | hPC-PL Pellet 人胎盤周細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人前列腺平滑肌細(xì)胞總RNAHPSMC NA |
Saos-2細(xì)胞，骨肉瘤細(xì)胞 人細(xì)胞,Hela P10s-11F細(xì)胞 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHBMEC NA | 心動(dòng)加速蛋白多肽抗體 |
L3MBTL3蛋白抗體 | 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(骨髓)(HMSC-bm)(5×105) |
蛋白酪激酶ATK抗體 | NDST1蛋白抗體 |
G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)突增生蛋白1抗體 | DYRK3 Others Human 人 DYRK3 / REDK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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