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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細胞 | 組織來源 | 結(jié)腸組織 |
英文名稱 | Mouse Colonic Mucosal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7491 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養(yǎng)方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細胞模型。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml) | 白介素9抗體 |
脫氫酶抗體 | 單克隆抗體 |
鋅指蛋白FYCO1抗體 | 多纖毛素蛋白抗體 |
22號染色體開放閱讀框29抗體 | 死亡相關(guān)蛋白5抗體 |
CD93抗體 | 同源盒蛋白PRH抗體 |
SEMA4A Others Human 人 SEMA4A / Semaphorin-4A 人細胞裂解液 (陽性對照) | ARSA Others Mouse 小鼠 ARSA 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人Burkkit淋巴瘤細胞;Daudi | CTNNB1 Others Mouse 小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
PDGFC Others Human 人 PDGF-C 人細胞裂解液 (陽性對照) | IFNA2 Others Mouse 小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HPAEC-c 人肺動脈內(nèi)皮細胞(HPAEC) 500,000cells 顱蓋造骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細胞 B16-F10 mouse melanoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS |
CM-M015小鼠胰島細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細胞多纖毛素蛋白抗體 |
CNE-2Z細胞，人鼻咽癌母系細胞 小鼠骨髓瘤細胞,SP2/0細胞 恒河猴腎細胞;RM-1 | 人腦干星形膠質(zhì)細胞HA-bs |
人腦成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL | TNFSF12 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 人 TNFSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CEACAM1 Others Human 人 CEACAM1 / CD66a 人細胞裂解液 (陽性對照) | 11號染色體開放閱讀框74抗體 |
酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體 | PC-2細胞，人胰腺癌細胞 人皮膚癌細胞系,HS-4細胞 小鼠黑色素瘤瘤株;B16 |
BRD2蛋白抗體 | 核纖層蛋白A識別因子抗體 |
酸化γ1氨基受體GABAA Rβ1抗體 | SEMA4A Others Human 人 SEMA4A / Semaphorin-4A 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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