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詳細介紹
小鼠直腸平滑肌原代細胞
小鼠直腸平滑肌細胞分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi)。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以門而終。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，下端變細接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式；腸炎時由于平滑肌特殊肌動蛋白的增加導(dǎo)致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產(chǎn)生，這進一步證明了炎癥時的腸平滑肌細胞具有可塑性。利用腸平滑肌細胞的培養(yǎng)，可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結(jié)締組織對平滑肌細胞的反應(yīng)。
英文名稱 | Mouse Rectal Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 直腸組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7169 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：小鼠直腸平滑肌細胞
組織來源：直腸組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠直腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠直腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
人張氏肝細胞;Chang liver | 免疫球蛋白超家族成員3抗體 |
多聚腺苷酸結(jié)合蛋白抗體 | 10號染色體開放閱讀框132抗體 |
α彈性蛋白抗體 | G蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體 |
NK細胞表面抑制性受體CD94抗體 | 動力結(jié)合蛋白DNMBP抗體 |
9號染色體開放閱讀框85抗體 | A型流感病毒H5N1凝集素 |
IL17RC Others Human 人 IL17RC (aa 1-454) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | 小鼠垂體細胞(MPC)(5×105) 5637, 人膀胱癌細胞 Human |
獼猴皮膚細胞;MMS4 | CDH5 Others Rat 大鼠 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NHEK.f single donor Pellet 正常人表皮角質(zhì)細胞團塊(少年者) > 1 mio.cells 小鼠顆粒細胞MGC | CD40 Others Canine 狗 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SOST Others Rat 大鼠 SOST / Sclerostin 人細胞裂解液 (陽性對照) | VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CL-0446SUP-B15(人Ph+急淋白血病細胞系)5×106cells/瓶×2 | 小鼠直腸平滑肌原代細胞G蛋白偶聯(lián)受體MAS相關(guān)蛋白抗體 |
IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大鼠肝動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL |
CCL22 Protein Human 重組人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 標簽) | EL4小鼠淋巴瘤細胞 EL4 mouse lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
FCGRT & B2M Others Rat 大鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) | 補體組分1q子成分樣蛋白1抗體 |
細胞鉀氯離子轉(zhuǎn)運蛋白抗體 | IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人細胞裂解液 (陽性對照) |
去整合素樣金屬蛋白酶18抗體 | 細胞粘附蛋白NGN抗體 |
絨毛膜特異性轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體 | IL17RC Others Human 人 IL17RC (aa 1-454) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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