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ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。血清是常用的ELISA試劑盒試驗常用的標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要內(nèi)源性干擾物質(zhì)具體有哪些方面？

有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

1、類風(fēng)濕因子

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基yi 醇等加入到標(biāo)本 稀釋液中，使RF降解。

2、補體

ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。

3、嗜異性抗體

人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig ( s ) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動 物Ig ( s ) ，但加入量不足或亞類不同時無效。

4、嗜靶抗原的自身抗體

抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。

5、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體

臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。

6、交叉反應(yīng)物質(zhì)

類di高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時 ，假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

7、標(biāo)本中其它成分的影響

血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及粘度過大等，均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用。

為了避免內(nèi)源性干擾物質(zhì)的影響，實驗操作中可以采取以下措施：

1. 樣本稀釋：對于急性感染特異IgM的檢測，可以通過稀釋標(biāo)本來降低RF的濃度，減少干擾。

2. 改變酶標(biāo)抗體：使用酶切去除Fc片段的酶標(biāo)抗體，只保留F(ab')2部分，以避免RF的干擾。

3. 選擇合適的試劑盒：使用要求對標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋的試劑盒，確保檢測的可靠性。

4. 樣本處理：避免溶血、細(xì)菌污染，確保樣本的新鮮和無污染狀態(tài)，減少內(nèi)源性干擾物質(zhì)的引入。

這些措施有助于提高ELISA實驗的準(zhǔn)確性和特異性，減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。