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室溫避光

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請盡快使用完！

一年

顯微鏡

1. 石蠟切片
2. 冰凍切片
3. 細(xì)胞

1.顯微鏡
2.移液器
3.吸頭

1. 4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如需脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，中性樹膠或其它封片劑。
2. 如樣品是石蠟切片，需自備90%乙醇，無水乙醇以及二甲苯。

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 次使用本試劑時建議先取1-2個樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
2. 染色時間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
3. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
4. 鹽酸乙醇分化時間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應(yīng)該足夠，以便清洗酸。
5. -乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，密閉保存。藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍(lán)液或0.1～1%溶液。
6. 冷凍切片染色時間盡量要短。

1. 樣品處理
石蠟切片：
二甲苯中脫蠟10-15分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再脫蠟10-15分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
30%乙醇2分鐘。
蒸餾水2分鐘。

冰凍切片：
回溫后的切片蒸餾水30秒-2分鐘。
-乙醇混合固定液固定。
自來水沖洗 。

培養(yǎng)細(xì)胞：
用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。
蒸餾水洗滌2分鐘。
換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2分鐘。

2. 2.1蘇木素染色
上述處理好的樣品：
染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。
自來水中流水沖洗去多余的染色液，約30-60秒。
蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。
(可選步驟，可不做) 鹽酸乙醇分化。自來水沖洗。藍(lán)化液返藍(lán)。自來水沖洗
（可接著直接入伊紅染液染色。）
即可直接觀察， 顯微鏡下觀察，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色。
如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染，可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行蘇木素染色。

2.2伊紅染色
上述處理好的樣品：
用蒸餾水浸潤組織1-2分鐘，確保蒸餾水覆蓋整個組織，使水分均勻分布。
伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。
70%乙醇洗滌2次后即可直接觀察或者繼續(xù)按后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明、封片。
脫水，透明，封片后鏡檢。
如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染，可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行伊紅染色。顯微鏡下觀察，細(xì)胞漿呈紅色。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。

3. 脫水、透明、封片或進(jìn)行其它染色
脫水、透明、封片：
95%乙醇脫水2分鐘。
換用新鮮的95%乙醇再脫水2分鐘。
二甲苯透明5分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再透明5分鐘。
用中性樹膠或其它封片劑封片。

其它染色：
如果進(jìn)行免疫熒光染色，或進(jìn)行Hoechst等熒光染料的染色，在蘇木素或伊紅染色液染色后：
70％乙醇洗滌2次，每次2分鐘。
PBS或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘。
然后就可以進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了。