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上海吉至生化科技有限公司
主營產品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
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2023-4-7 閱讀(514)
1.轉染前一天接種細胞于6孔板，5×104每孔，第二天轉染時細胞匯合度達到60%-70%每孔。
2.轉染前半小時將完、全培養(yǎng)基換無血清培養(yǎng)基1.9 ml。
3.A液：RNA 100 pmol/DNA 2μg （根據核酸類型不同，用量不同）加入50 ul Opti-MEM無血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。
4.B液：脂質體使用前輕輕混勻，脂質體5ul 加入50 ul Opti-MEM無血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。
5.B液加入到A液中，用槍輕輕混勻，室溫靜止20min。
6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板細胞中，邊滴加邊前后左右十字交叉輕輕搖晃。
7.孵箱37℃培養(yǎng)4~6h，然后將無血清培養(yǎng)基換成完、全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
8.mRNA 水平的檢測：在轉染后24-48h后，用Real-time PCR的方法在mRNA水平進行檢測。
9.蛋白水平的檢測：在轉染后48-72h后，用Western-blot或免疫組化的方法在蛋白水平進行檢測。
