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單細胞鋪板時如何鋪出合格的板子？
閱讀：261 發(fā)布時間：2022-9-9
單細胞鋪板是將一個孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底。
單細胞鋪板的好壞決定了后續(xù)實驗的成敗，這個實驗看似簡單，其實也不是那么好做，其中關(guān)鍵是要鋪得均勻鋪得平整，其中的操作蘊含著豐富技巧。
要鋪出一個好的板子，必須要做到一下幾點：
1、單細胞重懸
貼壁細胞培養(yǎng)完成后需要將細胞消化收集，并獲得單細胞懸液，但這時候即便消化下來也會連在一起了。這時我們需要注意：消化細胞需要選擇適用的消化液、適當?shù)南瘻囟群蜁r間；消化后需要輕輕拍打細胞貼壁面，震落細胞；少量培養(yǎng)基重懸，并用移液器反復(fù)吹散細胞。做到這幾點后獲得細胞懸液基本是單細胞懸液。
2、一步完成
獲得細胞懸液后要先根據(jù)選擇的培養(yǎng)板的種類，以及要種的細胞密度調(diào)整細胞懸液的濃度，可在離心管中調(diào)整后反復(fù)顛倒搖勻，種板需要一步完成，切不可先加細胞后補液或先加液再補細胞。
3、十字搖勻
細胞種板后將懸液鋪滿整個底面，為防止來回走動導(dǎo)致細胞局部不均勻，放置細胞培養(yǎng)箱內(nèi)做十字搖勻，搖勻后就不能再移動，直到細胞貼壁方可。
單細胞鋪板需要做到細胞均勻分布，密度適中。正確的鋪板需要獲得單細胞懸液，正確地調(diào)整密度，一步到位種植到培養(yǎng)板，通過十字搖法使細胞均勻分布。