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重組胰蛋白酶研究背景
胰蛋白酶是一種可以特異性水解肽鏈中的賴氨酸和精氨酸C‐端肽鍵的絲氨酸蛋白酶。在生物制品生產(chǎn)過程中作為一種重要的生物源性材料，廣泛應(yīng)用于病毒性疫苗、生物技術(shù)產(chǎn)品以及其他醫(yī)療產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，例如，流感病毒疫苗中病毒顆粒的激活、疫苗生產(chǎn)中動物細胞的傳代培養(yǎng)、胰島素單鏈前體轉(zhuǎn)化為雙鏈胰島素等。目前國內(nèi)的疫苗及胰島素生產(chǎn)企業(yè)仍然是以動物源性胰蛋白酶（從豬或牛胰腺中分離純化獲得）為主，但會存在生產(chǎn)工藝復(fù)雜、潛在的人畜共患性病原污染的風(fēng)險。近年來，由于生產(chǎn)過程中使用動物源性胰蛋白酶導(dǎo)致生物制品被外源因子污染案例時有發(fā)生，引起了人們對生物制品使用胰蛋白酶安全性的廣泛關(guān)注。隨著疫苗產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，胰蛋白酶的市場需求量也穩(wěn)步上升。此外，生物制品生產(chǎn)所需原輔料的安全性越來越受到重視和關(guān)注，無動物源性原輔料替代動物源性原輔料已成為必然趨勢。利用基因工程菌表達的重組胰蛋白酶因其純度高，安全性好，理化性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點受到越來越多的青睞。
重組胰蛋白酶來源和形式
重組胰蛋白酶是利用DNA重組技術(shù)在大腸桿菌中表達的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶一致，是由223個氨基酸構(gòu)成，含有6對二硫鍵。包含兩種胰蛋白酶活性形式：α‐胰蛋白酶（相對分子質(zhì)量23481）和β‐胰蛋白酶（相對分子質(zhì)量23463）。具有活性的重組胰蛋白酶的空間構(gòu)象表面暴露出精氨酸和賴氨酸，因此容易發(fā)生自水解，使得單鏈β‐胰蛋白酶通過自水解的形成雙鏈α‐胰蛋白酶，α‐胰蛋白酶通過其內(nèi)部二硫鍵維持結(jié)構(gòu)，但其活性及穩(wěn)定性均低于β‐胰蛋白酶?？商娲鷤鹘y(tǒng)提取胰酶用于疫苗、干細胞、免疫細胞治療、藥物篩選、抗體等領(lǐng)域細胞消化過程。
逐典重組胰蛋白酶是一款滿足藥典要求的GMP級非動物源胰蛋白酶
Trypelectase 重組胰蛋白酶是逐典生物專門為疫苗、病毒載體生產(chǎn)設(shè)計，具有高效、非動物源和高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特點。該胰蛋白酶氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致，由大腸桿菌(E.col) 重組表達生產(chǎn)。在GMP級別環(huán)境中生產(chǎn)的重組胰蛋白酶能高效消化貼壁細胞且不造成傷害，產(chǎn)品質(zhì)量滿足藥典要求。
逐典重組胰蛋白酶特點
1.GMP級生產(chǎn)環(huán)境、符合藥典標(biāo)準(zhǔn)
2.重組生產(chǎn)、不含雜酶
3.批量生產(chǎn)、質(zhì)量穩(wěn)定
4.高純度、高比活
5.非動物源原料
逐典重組胰蛋白酶應(yīng)用場景
組織塊的消化解離和原代細胞的獲取、貼壁細胞的傳代消化和收獲、微載體方法培養(yǎng)的細胞消化和收獲。
實驗數(shù)據(jù)
CT26.WT 和 HEK293FT 細胞消化實驗
CT26WT和HEK293FT在經(jīng)Trypelectase重組胰酶消化3min后解離效果較好，細胞活率顯示對細胞傷害較小，不會影響細胞傳代。
Trypelectase重組豬胰酶對細胞消化過程及傳代24h細胞貼壁圖
