產(chǎn)品名稱：BioLife CryoStor CS10 GMP凍存液 現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號：210102

產(chǎn)品介紹：

BioLife Solutions CryoStor®是BioLife公司特別優(yōu)化的細胞凍存液，在極低溫度 (-70ºC to -196ºC)下準備和保存細胞。預(yù)混DMSO，為細胞和組織的冷凍、儲存和解凍過程提供安全的保護環(huán)境。CryoStor®通過調(diào)控凍存過程的分子生物學(xué)反應(yīng)，無血清、蛋白或具有高細胞毒性的試劑，就能增強細胞活力和功能。

CryoStor使用說明書

準備細胞

1. 待冷凍細胞配制懸液（機械法或酶法解離）。

2. 細胞懸液離心獲得沉淀。

3. 去除上清液 - 注意：盡可能多地移除培養(yǎng)基，以降低CryoStor®凍存液被稀釋程度。

細胞凍存

4. 分離：加入預(yù)冷的（2-8°C）CryoStor®凍存液。

a. 細胞密度：0.5-10×10⁶  細胞/ mL，常規(guī)細胞培養(yǎng)方案（細胞密度可以更高）。

b. CryoStor®凍存液已經(jīng)混合了DMSO，不需要再添加其他任何凍存劑。

5. 預(yù)冷：細胞/CryoStor®混合懸液2-8°C孵育約10分鐘。

6. 成核：-70°C冷凍樣品（許多方案交替使用-70°C和-80°C）

a. 大多數(shù)哺乳動物細胞，使用程序降溫法 (-1°C/min)或類似方法。

b. 程序降溫盒或異丙醇容器需要預(yù)冷到 2-8°C。

c. 約-5℃時 （-70°C冷凍約15-20min后）啟動樣品內(nèi)的冰核形成（seeding），啟動方法可以是程序降溫儀控制的液氮噴放或是機械攪拌樣本（輕彈或輕拍）。

d. 使用異丙醇容器的冷凍時間（-70°C）建議為3-4小時。

保存樣本

7.樣本保存

a. 長時保存溫度液氮-130°C以下。

b.  -80°C 保存建議只能用于短時期保存，幾周到幾月。

樣本解凍

8. 解凍復(fù)蘇：37°C水浴快速解凍樣本。

a. 解凍時輕輕搖晃，直到看不到任何冰塊。1mL凍存管樣本解凍時間大約3分鐘。

b. 樣本不能在結(jié)冰點以上加熱（0-10°C）。水浴中拿出來時，凍存管觸感是冷的。不推薦被動解凍。

9. 立即用培養(yǎng)基稀釋細胞/CryoStor®混合物。

a. 稀釋步驟可以一步完成。

b. 稀釋用培養(yǎng)基溫度為20°C到 37°C。

c. 推薦稀釋比例≥1:10 （樣本：培養(yǎng)基）

10.合適的條件下培養(yǎng)細胞。

11. 使細胞進入培養(yǎng)環(huán)境或立即使用細胞。

12. 解凍后24h進行細胞活力檢測。*

注意：細胞活力檢測應(yīng)該在解凍后24h進行，以保證結(jié)果準確，并且以非冷凍樣本作為對照。

*解凍后立即使用細胞膜完整性指示劑進行樣本檢測，如臺盼藍，分析樣本細胞產(chǎn)量和活力，結(jié)果一般會高于正常值。

推薦使用更準確的活力檢測方法，活死細胞熒光分析或代謝分析（MTT or alamarBlue®）。

同時推薦視覺觀察方法，細胞貼壁和“漂浮”情況。

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