如何在液氮罐中進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇操作?
閱讀:1436 發(fā)布時(shí)間:2022-1-7
液氮罐俗稱液氮生物容器,是一種生物儲(chǔ)存容器,一般用于保存生物材料,像疫苗、細(xì)胞、動(dòng)物精液之類。當(dāng)打開液氮罐底部液體管道排放閥,液氮通過管道排出,經(jīng)過罐體底部蒸發(fā)器進(jìn)行汽化,這時(shí)汽化后的氣體進(jìn)入罐體頂部,提供液氮的罐內(nèi)壓力加壓,當(dāng)液氮罐需要給外接供氣時(shí),罐內(nèi)的液體靠罐內(nèi)壓力將液體壓出然后通過管道送到外界,液氮汽化后釋放出來,精液、細(xì)胞在充滿氮?dú)獾沫h(huán)境下滿足低溫保存。
不同類型的液氮罐差異如下:
1.加氣輸液型液氮罐靠內(nèi)部液氮產(chǎn)生汽化增大體積產(chǎn)生壓力讓液氮排出。
2.航空鋁液氮罐的蒸發(fā)量小,安全系數(shù)高。
3.不銹鋼小型液氮轉(zhuǎn)移杯,可以轉(zhuǎn)移少量樣品。
在低溫液氮的環(huán)境下,細(xì)胞能維持一定的活性,當(dāng)取出的細(xì)胞要想恢復(fù)細(xì)胞活性就要進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,如何利用液氮罐進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇操作呢?
1.取出凍存管后,直接放入37攝氏度的溫水中,不時(shí)搖晃讓其盡快融化。
2.取出的凍存管打開后使用吸管吸出細(xì)胞液,加到離心管滴加10倍以上的培養(yǎng)液混合均勻。
3.去除上清液,加入10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度,在37攝氏度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.待第二天更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。