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酶標(biāo)板在使用過程中是有幾步需要操作

閱讀:1422        發(fā)布時(shí)間:2021-11-3
  酶標(biāo)板在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。
  酶標(biāo)板是酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中的重要載體工具,分為可拆和不可拆的,一般用的較多的是可拆的酶標(biāo)板。在使用時(shí),按照以下步驟操作:
  1、加樣品:將標(biāo)本稀釋液加到包被板內(nèi),將需要檢測(cè)的血清用PBS或生理鹽水按照1:20的比例稀釋后取10ul加入到酶標(biāo)板的反應(yīng)孔內(nèi)。
  2、加對(duì)照:加入陰性對(duì)照3孔,陽性對(duì)照1孔,還有100ul的對(duì)照血清。
  3、進(jìn)行溫育:將反應(yīng)板震蕩,使樣品充分的混勻,置于37℃的溫箱或者水浴反應(yīng)20分鐘的時(shí)間。
  4、洗板:用蒸餾水將洗滌液15ml稀釋至300ml的體積。手洗的時(shí)候應(yīng)該將反應(yīng)板孔內(nèi)的容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔的位置,然后放置30秒鐘后用力甩去,這樣的動(dòng)作重復(fù)5次后開始拍干。機(jī)洗需要進(jìn)行5次,每孔注入洗滌液200ul或者可以注滿,然后停留30秒鐘后吸盡拍干。
  5、加酶標(biāo)工作液:在每孔內(nèi)加入100ul的酶標(biāo)工作液,放置到37℃的溫箱中,反應(yīng)20分鐘后洗板5次,洗板的操作和上述步驟4是相同的。
  6、這是反應(yīng)的最后一步,就是顯色和終止反應(yīng):將底物50ul加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃條件下避光顯色10分鐘的時(shí)間。在每孔內(nèi)加入終止液50ul混勻用以終止反應(yīng)。

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