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孵育盒在免疫印跡實驗中的應用
閱讀：481 發(fā)布時間：2022-10-25
孵育盒采用物理分隔的方式將膜分格成小室，對應待孵育抗體通過注液孔直接注入小室孵育，不需要額外的孵育盒或者雜交袋，更免去剪膜和反復做記號的麻煩，可整張膜進行免疫印跡實驗，記錄實驗結(jié)果更完整和方便。
免疫印跡實驗是目前實驗室進行免疫檢測常用的實驗方法之一。與ELISA實驗方法相比，免疫印跡實驗實驗流程更繁瑣，工作量更大，如果對多個樣品同時進行檢測，通常是將轉(zhuǎn)印之后的膜一條條剪下，分別放入對應的一抗小孵育盒子或者雜交袋；漂洗之后再分別加入對應的二抗分別孵育；實驗過程中需要在每張膜條上做標記，其工作量相當大，一旦標記錯誤或記錄錯誤都會造成很麻煩。
一抗孵育：
1、打開孵育器，將孵育器的上蓋取下，底板放平，適當調(diào)整膠墊位置處于中間位置，并用封閉液將膠墊表面潤濕；
2、將封閉好的整張膜（膜尺寸應該小于膠墊尺寸），輕輕平鋪在膠墊上面，從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡；
3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上，將長方形液槽一面與膜接觸，膜上彩色Marker條帶置于對應槽正中位置，均勻擰緊四角緊固螺絲（緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜），液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室；
4、將對應抗體工作液分別通過對應液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室，抗體工作液一般的注入量不超過液槽小室總?cè)莘e的3／4；5、抗體工作液注入之后可將整個孵育器平放在搖床震蕩孵育（振幅不可過強），也可以平放在合適的溫度靜置孵育。