實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。一次PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（溫度梯度），通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。

 

　　PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2＋和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。

 

　　實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運(yùn)用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析，在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通PCR儀。PCR擴(kuò)增時加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實(shí)時采集信號并輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實(shí)時輸出量化結(jié)果，這樣的PCR儀叫實(shí)時熒光定量PCR儀。

 

　　PCR也叫基因擴(kuò)增儀，主要用于用于科研及醫(yī)學(xué)臨床的基因擴(kuò)增、定性PCR基因擴(kuò)增、熒光／酶免終點(diǎn)定量DNA基因擴(kuò)增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴(kuò)增等。基因擴(kuò)增儀適合國內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類、腫瘤類、科研類。進(jìn)口基因擴(kuò)增儀主要由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機(jī)界面等各部分組成。

 

　　常見故障：

 

　　1、個別孔擴(kuò)增效率差異很大，可能的原因是半導(dǎo)體模塊出現(xiàn)壞點(diǎn)；

 

　　2、儀器工作時出現(xiàn)噪音；

 

　　3、熒光染料污染樣品孔；

 

　　4、熒光強(qiáng)度減弱或不穩(wěn)定，產(chǎn)生的原因有濾光片發(fā)霉或有水汽，或光源損耗（以鹵鎢燈為光源的），需更換光源；或需調(diào)節(jié)檢測元件靈敏度；

 

　　5、PCR管融化，原因可能是溫度傳感器出問題或是熱蓋出問題。