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磁珠提取實時熒光定量PCR怎么實現(xiàn)一次檢測多種目的基因?

閱讀:334      發(fā)布時間:2022-8-28
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    磁珠提取實時熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),實時熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的,而普通的PCR儀是做定性分析和擴增基因片段,定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作,而反之就不行了,況且這樣代價太大了,一般的實驗室都不允許這樣做的。總之兩者的功能不能互相取代。
 
    一般來講PCR升降溫速度越快,實驗需要的時間越少。需要的時間越少,意味著在中間溫度可能產(chǎn)生的非特異擴增越少。并且,通常升降溫速度,也從側(cè)面體現(xiàn)了儀器控溫能力的好快。
 
    PCR儀就價格來看,每秒變溫越多(現(xiàn)在主流的是每秒4到7攝氏度),價格就越高,儀器越好。主要因為加熱模塊材質(zhì)的差別。在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。
 
    其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。
 
    磁珠提取實時熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

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