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超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒

可見分光光度法

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時加 27mL 蒸餾水配制成懸濁液，使用前充分搖勻； 試劑三：液體 160μL×1 支，4℃保存；

試劑四：液體 11mL×1 瓶，4℃保存。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產(chǎn)品說明：

SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過黃-嘌呤及黃-嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)，O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜， 后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍色越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

1.   細菌或培養(yǎng)細胞：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500-1000:1  的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2.   組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10  的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入

1mL 提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3.   血清（漿）樣品：直接檢測。二、測定步驟：

1.   分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 560nm，蒸餾水調(diào)零。

2.   測定前將試劑一、二和四 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上。

3.   樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）

4.

充分混勻，室溫靜置 30min 后，加入 1mL 玻璃比色皿，560nm 處測定各管吸光值 A。ΔA 測定

=A 測定-A 對照，ΔA 空白=A 空 1-A 空 2。注意：

1、試劑二為懸濁液，注意混勻后加入。試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、樣本較多時，可按表格配置工作液（包含試劑一、二、四），試劑三必須最后加入。

3、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管；每個樣本有一個對照管。

4、反應(yīng)完成后，可能有沉淀生成，混勻后測定即可。三、SOD 活性計算：

1、 抑制百分率的計算

抑制百分率＝( ΔA 空白－ΔA 測定) ÷ΔA 空白× 100%

盡量使樣品的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)，越靠近 50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于 30%或大于 70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣品。

2、 SOD 酶活性單位：在上述黃-嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時，反應(yīng)體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位。

3、 SOD 酶活性計算：

（1）  血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數(shù)

=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù)

（2） 組織、細菌或培養(yǎng)細胞 SOD 活力計算：

A 按樣本蛋白濃度計算

SOD 活性(U/mg prot)=〔抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反總〕÷（V 樣×Cpr）×樣本稀釋倍數(shù)

=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù)B 按樣本鮮重計算

SOD 活性(U/g 鮮重)=〔抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反總〕÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數(shù)

=11.4×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷W×樣本稀釋倍數(shù)C 按細菌或細胞個數(shù)計算

SOD 活力(U/104 cell)=〔抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總〕÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數(shù)

=0.0228×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.026mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.09mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)， 500 萬。

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