細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的兩個分類介紹
閱讀:458 發(fā)布時間:2023-12-25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用越來越廣泛。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源遺傳物質(zhì)(DNA或RNA)導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時轉(zhuǎn)染:外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但持續(xù)時間只有幾天(數(shù)天內(nèi)大部分外源性 DNA 會在核酸酶作用下降解或被細(xì)胞分裂稀釋,一周后便無法再檢出)。使用超螺旋質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)染的效率高,因為其能被細(xì)胞更高效地攝取。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:外源性DNA可以整合至細(xì)胞基因組中,或者作為游離型質(zhì)粒存在,并可傳遞至轉(zhuǎn)染細(xì)胞的子代。但通常只有單個或幾個拷貝的外源性DNA整合至穩(wěn)定轉(zhuǎn)染基因組中,因此穩(wěn)定轉(zhuǎn)染基因的表達(dá)水平一般低于瞬時轉(zhuǎn)染基因的表達(dá)水平。由于外源性DNA穩(wěn)定整合至基因組的概率很低,因此通常在用于轉(zhuǎn)染的DNA構(gòu)建體中納入可篩選標(biāo)記物(如對各種篩選藥物產(chǎn)生抗性的基因,或是可對待轉(zhuǎn)染細(xì)胞系有缺陷的必需基因進(jìn)行補償?shù)幕颍?,然后在短暫的恢?fù)期后對細(xì)胞施加適當(dāng)?shù)暮Y選壓力。