MM.1S+LUC+GFP人多發(fā)性骨髓瘤細胞

細胞描述

該細胞系的母細胞株MM.1是從一位對類固醇療法產生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1S是從MM.1中分離出來的，對地塞米松敏感。該細胞復蘇后需要兩周左右才能恢復正常生長。

細胞特性

1） 來源：人、女性、外周血

2） 形態(tài)：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁同時存在

3） 含量：>1x106細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用專用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備1640培養(yǎng)基,優(yōu)質胎牛血清10 %，P/S青霉素-鏈霉素 1%

2） 注意事項：

a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。

b.該細胞復蘇后需培養(yǎng)2周左右時間，才能恢復正常生長狀態(tài)。

c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳代，過度融合生長細胞容易產生死細胞團。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

該細胞是一種混合生長的細胞；細胞既可以以輕度附著的單層形式生長，也可以以懸浮液形式生長。可以通過添加新鮮培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)。或者，可以通過將貼壁細胞用細胞刮鏟刮入含有漂浮細胞的培養(yǎng)基中，通過離心收集細胞，將細胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細胞進行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進行。后續(xù)的傳代可根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

上海語純生物科技有限公司，是由具有*生命科學、生物技術背景人員共同創(chuàng)辦的技術企業(yè)。公司專注于原代細胞、腫瘤細胞及細胞培養(yǎng)相關試劑產品，為高校、食品、醫(yī)藥、生物研究等領域提供相關技術支持和服務。

公司自成立以來通過不斷地科技創(chuàng)新，產品研發(fā)，已為客戶提供定制化細胞產品以及完整的細胞培養(yǎng)解決方案，通過積極地探索、研發(fā)、深化和豐富產品，目前基礎培養(yǎng)基產品種類多達200多種，細胞系300多種，原代細胞接近600種。我們始終以“發(fā)展科學技術，關愛公眾生命健康"為動力，通過技術創(chuàng)新，廣泛吸納高科技人才，不斷完善產品體系、豐富產品鏈，積極拓展市場，擴充應用領域，，建立了具有市場競爭力的“語純"品牌。

注意事項

1、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及口罩操作；

2、為保持本產品的優(yōu)良使用效果，請務必按照建議的儲存條件進行保存；

3、本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。

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