總巰基測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

總巰基測(cè)定試劑盒 抗氧

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱gan肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)，而且參與活性氧清除，后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和GSH 含量，能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。

測(cè)定原理：

巰基基團(tuán)與 5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有最大吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1ml 玻璃比色皿、乙醇和蒸餾水。

樣品的制備：

按照組織質(zhì)量（g）：水體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清，培養(yǎng)液：稀釋 5 倍后測(cè)定，可取 0.1ml 樣本，加入 0.4ml 蒸餾水，混勻，置冰上待測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm，雙蒸水調(diào)零。

2、操作表

在 1ml 玻璃比色皿中加入如下試劑

計(jì)算公式：

總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x 為標(biāo)品濃度，單位μmol/ml， y 為吸光度ΔA。

組織：

按樣本重量計(jì)算

總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V 樣總÷W

=0.276×（ΔA+0.0037）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算

總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V 樣總÷Cpr

=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr

血清、培養(yǎng)液：

總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×103

=1380×（ΔA+0.0037）

V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養(yǎng)液等液體樣本稀釋倍數(shù)；103 ：1mmol/L=103μmol/ L

注意事項(xiàng)：

最di檢出限為 10μmol/L。

總巰基測(cè)定試劑盒 抗氧