淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）試劑盒說明書

分光光光度法 50 管/24 樣

淀粉分支酶試劑盒

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測定SBE 活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

測定原理：

直鏈淀粉和碘結(jié)合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直鏈淀粉含量減少，從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在 660nm 吸收值，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE 活性。

組成：

試劑二臨用前每支加入 1mL 蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解后備用；用不完的試劑 4℃保存；

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

粗酶液制備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

混勻，37℃準(zhǔn)確保溫 20 min，95℃水浴 5min（蓋緊防止水分散失），冷卻

混勻，室溫靜置 10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm 處讀取各管吸光值。

注意：

1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行 5min 95℃水浴處理。

2、試劑二如有沉淀，務(wù)必沸水浴溶解后使用。

SBE 活力單位的計(jì)算：

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE 活性(U/mg prot)=( A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷Cpr ×100 2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每g 組織在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE 活性(U/g 鮮重)=(A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷(W÷V 樣總)×100

V 樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

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